НОВЫЕ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ BREVIBACTERIUM SPECIES

Аннотация:

В клетках Brevibacteriurn species А обнаружена активность двух новых ферментов рестрикции BecAl и BecAII. Эндонуклеаза BecAII, очищенная хроматографией на колонках с фосфоцеллюлозой, гепарин-сефарозой и ДНК-целлюлозой, не содержала примесей неспецифических эндонуклеаз, экзонуклеаз и фосфатаз. Установлено, что эндонуклеаза рестрикции BecAII узнает и разрезает нуклеотидную последовательность 5'СО^СС-З' и является истинным изошизомером Haelll. Вторая эндонуклеаза рестрикции BecAl расщепляет ДНК Ad2 по крайней мере в 2 сайтах и не имеет участков узнавания на ДНК фага X, Т7, SV40, (рХ174, плазмидах pBR322 и pUC19. Субстратная специфичность BecAl указывает на ее принадлежность к сверхкрупнощепящим ферментам рестрикции. Среди эндонуклеаз рестрикции II класса, нашедших широкое применение в молекулярно-генетических исследованиях, особое место занимают так называемые сверхкрупнощепящие эндонуклеазы ("superi'are-cutting restriction endonucleases"). Эти ферменты узнают протяженные участки нуклеотидной последовательности ДНК из восьми уникальных нуклеотидов и в сочетании с методами пульс-электрофореза и ПЦР успешно используются для контролируемого расщепления про- и эукариотических ДНК с целью получения укрупненных фрагментов ДНК, необходимых для изучения структуры и функции генома и создания субхромосомальных библиотек. К настоящему времени известно более 200 эндонуклеаз рестрикции с различной специфичностью действия (прототипов), однако среди них насчитывается лишь 9 сверхкрупнощепящих ферментов [12]. Ранее нами был обнаружен и идентифицирован ряд новых эндонуклеаз рестрикции II класса [5, 10, II, 14, 15] и среди них эндонуклеаза CspBI, изошизомер Noti, узнающая восьминуклеотидный палиндром 5'-GC^GGCCGC-3' [1,16]. В данной работе сообщается об обнаружении у штамма В. species двух сайт-специфических эндонуклеаз, одна из которых - BecAII - является изошизомером Haelll, а другая - BecAl, вероятно, относится к сверхкрупнощепящим ферментам рестрикции и может представлять собой новый прототип.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.35-38
Просмотров: 39