СИЛЬНОЕ ИНГИБИРОВАНИЕ АКТИВНОСТИ ЭНДОДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗ ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ЗНАЧЕНИЯХ ИОННОЙ СИЛЫ

Аннотация:

Обнаружено ингибирование активности эндонуклеаз более чем в 100 раз при добавлении в реакционную смесь сульфата аммония до концентрации 50 мМ или других солей (NaCI, KCI, NH4CI, КН2РО4, Na2SO4) с той же ионной силой при рН 7-9. В этих условиях активность 3' - 5'-экзонуклеазы или ДНК-полимеразы а подавляется не более чем в два раза. Эффект ингибирования выражен для большинства проверенных эндонуклеаз - ДНКазы 1 из поджелудочной железы крупного рогатого скота, экстрактов эмбрионов Drosophila melanogaster, печени, селезенки и головного мозга крысы, тимуса и селезенки теленка, а также высокоочищенных и частично очищенных эндонуклеаз из перечисленных источников. Ингибирование эндонуклеазной активности проявляется в одинаковой степени при использовании в качестве субстрата нативной или денатурированной ДНК из Е. соН, двунитевой ДНК фага ^, однонитевой кольцевой ДНК фага фХ174 и его репликативных форм. Подавление эндонуклеазной активности in vitro при концентрации солей, близкой к физиологическому уровню в клетке (150-200 мМ), может быть одной из причин относительно низкого уровня активности эндонуклеаз in vivo (а также в клеточных экстрактах) и активации эндонуклеазной деградации ДНК при апоптозе (локальное снижение ионной силы может приводить к активации клеточных эндонуклеаз). Подавление эндонуклеазной активности в присутствии умеренных концентраций солей в клеточных экстрактах и на ранних стадиях очистки ферментов позволяет измерять истинное значение активностей ферментов метаболизма ДНК (ДНК-полимеразы, ДНК-хеликазы, ДНК-топоизомеразы, экзонуклеазы и др.), а также определять точность синтеза ДНК в клеточных экстрактах, защищая от деградации наиболее часто используемые ДНК фагов М13 и фХ174.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 4.-С.741-744
Просмотров: 21