ПРЯМАЯ ДЕТЕКЦИЯ ДНК TREPONEMA PALLIDUM В КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ И КРОВИ ДОНОРОВ МЕТОДОМ ПЦР С ГАРАНТИЕЙ ДОСТОВЕРНОСТИ ОТРИЦАТЕЛЬНОГО РЕЗУЛЬТАТА

Аннотация:

Основу диагностики сифилиса составляют серологические методы, устанавливающие наличие в крови больных антител к различным антигенам бледной спирохеты. Иммуно-ферментный анализ (ИФА), в частности используется для освидетельствования донорской крови на сифилис. Однако, процент ложноогрицательных и особенно ложноположигельных результатов ИФАтестирования на антитела к Treponema pallichim является существенно более высоким, чем при ИФА-тестировании антител к другим вирусным и бактериальным возбудителям. Например, V.W. Hailing et al (Mayo Clinic, USA) на 50-й конференции американской ассоциации банков крови в Денвере (18-22 ок1ября 1997 г.) представили данные о том, что в группе из 41 положительных и 48 отрицательных на сифилис сывороток, оттестированных методом флуоресцентной адсорбции трепонемных антител (FTA-ABS), истинно отрицательными оказались 59, аистинно положительными- 30 [1]. Необходимость в методе прямого тестирования возбудителя сифилиса в клиническом материале возникает не только из-за недостаточной специфичности серореакций, в том числе и ИФА, но и по причине возможной контаминации больших пулов плазмы в производстве препаратов крови. Как правило, сведения о том, что в данном пуле присутствует одна или несколько доз плазмы от доноров, сероположительных на сифилис, поступают уже после переработки плазмы на препараты. В соответствии с официальными нормами России, приготовленные из такого сырья препараты иммуногдобулинов, факторов свертывания крови и другие должны подвергатьсяуничтожению. Чтобы избежать таких больших материальных потерь (только на СПК КЗ г. Москвы) на сумму около 2 миллиардов рублей в год), мы разработали прямую детекцию ДНК Treponema pallidum в клиническом материале, плазме, сыворотке и препаратах крови. Созданная нами ПЦР-тест-система второго поколения ддя детекции ДНК возбуцителя сифилиса, благодаря так называемому внутреннему стандарту исключает получение ложноотрицательного результата и тарантирует чувствительность - 25 микроорганизмов в пробе. Материалы и методы За основу взяли условия ПЦР-детекции ДНК Treponema pallidum в сыворотке и спинномозговой жидкости, описанные F. Grabnitz et al. [2], которые детектировали до 5 микроорганизмов в исследуемой пробе. Из отдела микробиологии ЦНИКВИ получили кулиуральный штамм Рейтера и на нем воспроизвели условия ПЦР-детекции фрагмента ДНК длиной 208 пар оснований, расположенного в гене мембранного белка иммуногенности 47 кДа. Культура непатотенной Treponeinaphaqedems биотип Reiter и биотип IX получен из ЦНИКВИ г. Москва. Концентрацию спирохет определяли при 400-кратном увеличении в темнопольном микроскопе (24). Нативный материал в виде соскобов с шанкров и папул наружных половых органов и из сывороток был получен из ЦНИКВИ, КВД № 16, диагностического центра Южного округа г. Москвы и института <Микроб>, г. Саратов.

Авторы:

Издание: Вестник службы крови России
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.18-21
Просмотров: 158