ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ EcoRI С КОРОТКИМИ СПЕЦИФИЧЕСКИМИ И НЕСПЕЦИФИЧЕСКИМИ ОЛИГОНУКЛЕОТИДАМИ

Аннотация:

Кинетико-термодинамический анализ взаимодействия эндонуклеазы EcoRI со специфическими и неспецифическими олигонуклеотидами (ОН) различной структуры и длины показал, что любые одноцепочечные ОН и их дуплексы ингибируют реакцию, катализируемую ферментом. Определены характеристики сродства фермента к ОН и к минимальным лигандам фермента, включая ортофосфат (К; = 31 мМ) и дезоксирибозофосфат (К, = 4.6 мМ). Увеличение длины ОН на одно звено до н < 6 приводит к увеличению их сродства примерно вдвое. Большое число слабых неспецифических контактов EcoRI с межнуклеозидными фосфатными группами ДНК обеспечивает около пяти порядков, в то время как вклад специфических взаимодействий EcoRI и ДНК не превышает 2-х порядков от общего сродства ОН. Результаты анализа закономерностей функционирования EcoRI согласуются с данными рентгеноструктурного анализа фермента (РСА) [1-3], однако остается необходимость уточнения представлений об относительной роли специфических и неспецифических взаимодействий фермента с ДНК на стадии комплексообразования, а также о необходимости подгонки конформации ДНК до оптимальной для фермента на последующей стадии катализа, обеспечивающей специфичность действия фермента.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 1998.-N 6.-С.1025-1033
Просмотров: 25