ОБНАРУЖЕНИЕ НЕСТРУКТУРНОГО БЕЛКА р21 КЛОСТЕРОВИРУС ЖЕЛТУХИ СВЕКЛЫ in vivo С ПОМОЩЬЮ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К БЕЛКУ, ЭКСПРЕССИРОВАННОМУ В БАКТЕРИЯХ

Аннотация:

3'-концевая открытая рамка трансляции (ОРТ8) в позитивном РНК-геноме клостеровируса желтухи свеклы (ВЖС) кодирует гипотетический неструктурный белок с мол. массой 21 кДа. ОРТ8 амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции и полученную кДНК клонировали под контролем Т5-промотора в бактериальном экспрессирующем векторе pQE30. Рекомбинантный белок р21, имеющий N-концевую последовательность из шести остатков гистидина, экспрессирован в клетках Е. соН, очищен с помощью металл-хелатной хроматографии и использован в качестве иммуногена для получения кроличьей антисыворотки (Ас-р21). С использованием иммуноглобулинов класса G, полученных из истощенной Ас-р21, белок с мол. массой 21 кДа обнаружен в зараженных ВЖС растениях Tetrugonia expansa. При анализе субклеточных фракций зараженных листьев методом иммуноблотинга показано, что основное количество р21 содержится во фракциях цитоплазмы и клеточных стенок. Белок обнаруживался во всех зараженных вирусом образцах, взятых в интервале от 20 до 120 дн. после инокуляции, что, по-видимому, может указывает на постоянный синтез р21 или же на стабильность самого белка при вирусной инфекции.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 6.-С.1095-1098
Просмотров: 44