СВОЙСТВА РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ХВОСТОВОГО ЧЕХЛА БАКТЕРИОФАГА Т4 И ЕГО ДЕЛЕЦИОННЫХ ФРАГМЕНТОВ

Аннотация:

Сконструирован вектор экспрессии рекомбинантного белка хвостового чехла бактериофага Т4 (пг18) в клетках Escherihia coli под контролем промотера фага Т7. Полноразмерный рекомбинантный пг18 (659 аминокислотных остатков) полимеризуется in vivo в протяженные поличехлы. С целью изучения механизмов фолдинга пг18 сконструировано шесть векторов, экспрессирующих делеционные мутанты белка. Три белка - IN, 2N и 3N- содержат соответственно 268, 316 и 372 аминокислотных остатков N-концевой области пг18. Три других фрагмента -1С, 2С и ЗС- содержат соответственно 455, 356 и 288 аминокислотных остатков С-концевой области пг18. Фрагменты IN, 2N, 1С, 2С и ЗС при экспрессии образуют нерастворимые агрегаты. Однако фрагмент 3N накапливается в цитоплазме клетки в растворимой форме и не формирует полимерные структуры, что позволило разработать для него эффективный метод очистки. Изучено взаимодействие специфических моноклональных антител к рекомбинантному пг18 с полученными фрагментами белка, а также с чехлом фага до и после сокращения. Фрагмент 3N, по-видимому, представляет стабильный домен нативного пг18, формирующего сократимый чехол фага.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 1998
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 1998.-N 6.-С.833-841
Просмотров: 20