ПРИМЕНЕНИЕ ТВЕРДОФАЗНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА В ФОРМАТЕ МИКРОЧИПА ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ ЦИТОКИНОВ

Аннотация:

В настоящей работе описан мультиплексный «сэндвич»-вариант твердофазного иммуно-ферментного анализа в формате иммунологического микрочипа для количественной оценки белкового профиля экспрессии цитокинов. На примере IL-2, IL-4,1L-10 и TNF человека показана высокая специфичность метода, широкий диапазон измеряемых концентраций (от 30 до 20000 пг/мл) и высокая производительность. Представленный метод может быть в дальнейшем использован как в научных, так и клинических исследованиях. В последние 20 лет методы определения белкового профиля цитокинов интенсивно развивались и совершенствовались . В настоящее время широко применяют такие методики, как иммуноферментный анализ (ИФА), проточная флуориметрия, вестерн-блотинг, имму-ногистохимия in situ, однако они имеют существенное ограничение по числу одновременно определяемых цитокинов в одной пробе. Этого недостатка лишен метод биологических микрочипов, позволяющий проводить одновременный анализ специфических взаимодействий сотен и даже тысяч молекул в одной реакции. Существует два основных формата иммунологических микрочипов: 1) антигены, входящие в состав исследуемой иммобилизованной пробы, выявляют посредством специфического меченого антитела, или 2) иммобилизованные антитела связывают антигены в составе тотально меченой белковой пробы. Во втором случае детекцию взаимодействия можно также проводить с помощью дополнительных меченых антител в формате двух-стадийного «сэндвич»-варианта твердофазного ИФА. Такой подход обладает наиболее высокой чувствительностью, что чрезвычайно важно для детекции цитокинов, значимо экспрессиру-ющихся даже в фемтомолярных концентрациях, и именно он был применен в данной работе.

Авторы:

Издание: Медицинская иммунология
Год издания: 2012
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2012.-N 4-5.-С.415-418. Библ. 3 назв.
Просмотров: 195