МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К БЕЛКУ НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ BRANHAMELLA CATARRHALIS, РЕАГИРУЮЩИЕ С ТРЕМЯ СПЕЦИФИЧЕСКИМИ БЕЛКАМИ МЕНИНГОКОККОВ

Аннотация:

Исследование иммунологической активности функциональной роли индивидуальных белков наружной мембраны грамотрицательных бактерий, таких как Branhamella catarrhalis и Neisseria meningitidis, представляет значительный интерес с точки зрения использования антигенов в диагностических и профилактических целях. Несмотря на возрастающую роль B.catarrhalis в этиологии заболеваний респираторного тракта, отитов, конъюктивитов, внешнемембранные белки этих бактерий мало изучены. Поскольку структурные и функциональные особенности различных белков наружной мембраны менингококков изучены более подробно, чем соответствующие белки B.catarrhalis, а указанные микроорганизмы таксономически близки, нами было проведено сравнительное исследование белковых антигенов этих бактерий с помощью панели моноклональных антител (МКАТ) к различным антигенам B.catarrhalis. Для получения МКАТ мышей линии Balb/c трижды иммунизировали с интервалом в 3 нед, вводя в/б по 10 млн м.к. B.catarrhalis. Затем проводили слияние иммунных селезеночных лимфоцитов и миеломы РЗ-Х63.Ад8-653 на 3 день после последней иммунизации согласно опубликованному методу (Davidson R.L. et al., 1977). После этой процедуры клонировали гибридомы методом лимитирующих разведений и скринировали супернатанты растущих гибридом и клонов методом точечного иммуноблота. B.catarrhalis (штамм 36621) культивировали на питательной среде Todd Hewitt Broth фирмы (США). В качестве антигенных препаратов были использованы ультразвуковой дезинтеграт B.catarrhalis и препараты N.meningitidis (штамм В125), полученные в условиях различного содержания железа в среде культивирования. Избыток железа (Fe*) создавался путем введения в среду 0,5 мМ хлорида трехвалентного железа (РеС1д х Н^О), а недостаток железа (Fe") - введением в среду 0,25 мМ диэтилентриаминопентауксусной кислоты, связывающей ионы трехвалентного железа в прочный хелато-комплекс (Филатова Т.Н. с соавт., 1991). Использовались 5 следующих препаратов из менингококков: 2 клеточных аутолизата, приготовленные на Fe* и Fe' -средах; очищенный белковый препарат, приготовленный на Fe'-среце и содержащий, в основном, 2 белка: серотиповой 39-40 кД и железорегулируемый белок (ЖРБ) 70 кД; очищенный белковый препарат, приготовленный на Ге*-среде и содержащий преимущественно 1 серотиповой белок; а также белковый препарат, приготовленный на Fe'-среде, очищенный с помощью двойной солюбилизации цетавлоном и водой и содержащий, в основном, ЖРБ 37 кД. Электрофорез антигенов проводили по методу Laemmii в 10% полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия и меркаптоэтанола. Далее белки переносили на нитроцеллюлозную мембрану (0,8 мА на 1 см' геля), которую затем инкубировали в культуральных супернатантах и проявляли кроличьими антителами к иммуноглобулинам мыши, меченным пероксидазой.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 1998
Объем: 2с.
Дополнительная информация: 1998.-N 1.-С.85-86
Просмотров: 96