РАННЯЯ ТРАНСКРИПЦИЯ ГЕНОМААДЕНОВИРУСА ПТИЦ FAV-I (CELO)

Аннотация:

Аденовирус птиц CELO (chicken embryo lethal orphan) обладает наибольшим геномом в семействе Adenoviridae f8]. Организация генома CELO значительно отличается от таковой аденовирусов млекопитающих. В его составе не обнаружено областей, которые можно было бы идентифицировать как Е1 и ЕЗ, и неизвестна локализация области транскрипции Е4 [8]. Имеется ограниченная гомология у вируса CELO и других аденовирусов в структуре генов, кодирующих капсидные белки. В литературе отсутствовали какие-либо данные, характеризующие транскрипцию ранних областей этого вируса. Данное исследование посвящено выявлению и анализу мРНК аденовируса CELO, синтезируемых в пермиссивных клетках на ранних стадиях инфекции в присутствии циклогексимида, который блокирует процесс трансляции в зараженной клетке, способствуя накоплению ранних мРНК и предотвращая экспрессию поздних генов. Метод анализа, использованный нами, - Nonhern-гибридизация. Сложность дифференциации разных классов РНК при постановке Northern-гибридизации связана с возможностью совпадения размеров РНК, гибридизующихся с разными участками генома. Поэтому для дифференциации различных классов РНК мы учитывали кинетику их синтеза. Материалы и методы Вирус CELO был выращен в аллантоисной полости 10-дневных куриных эмбрионов, выделен и очищен по методике, описанной ранее [4]. Клетки почек цыплят, выращенные в течение 24 ч, инфицировали вирусом CELO с множественностью 100 БОЕ/клетка. После адсорбции в течение 1 ч при 20°С флаконы заливали средой 199 с 1% эмбриональной сывороткой крупного рогатого скота и инкубировали при 37°С в присутствии 5% СО^. После 1 ч инкубации в культуральную среду добавляли циклогексимид до конечной концентрации 2,5%. Тотальную клеточную РНК выделяли через каждый час после начала инкубации в течение первых 5 ч по методике [10]. Образцы РНК (15 мкг каждого) были электрофоретически разделены в 1% (масса/объем) агарозо-формальдегидных MOPS-гелях (II х II х 1 см), капиллярно перенесены на Hibond-N-нейлоновую мембрану ("Amersham Ltd", Англия) и фиксированы под ультрафиолетом.

Авторы:

Издание: Вопросы вирусологии
Год издания: 1998
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 1998.-N 6.-С.279-283
Просмотров: 50