Создание рекомбинантного аденовируса, кодирующего кодон-оптимизированный ген дисферлина, и анализ экспрессии рекомбинантного белка в культуре клеток in vitro

Аннотация:

Дисферлинопатии человека относят к нейромышеч-ным заболеваниям, связанным с нарушением экспрессии и/или функции белка дисферлина [dystrophy-associated fer-1-like, DYSF) в скелетной мышце, что обусловлено мутациями в гене dysf. Вследствие большого размера кодон-оптимизированного гена dysf [6243 п.н.) для создания генетических конструкций подходят аденовирусные векторы, которые способны доставлять большой объем реком-бинантной генетической информации как в делящиеся, так и в неделящиеся клетки, а также обеспечивают высокий уровень экспрессии трансгенов. Нами получен рекомбинантный аденовирус серотипа 5, кодирующий кодон-оптимизированный ген дисферлина человека (Ad5-Dysf) и проведен анализ экспрессии рекомбинантного белка in vitro в культуре клеток НЕК-293Т. Ключевые слова: рекомбинантный аденовирус, дисферлин, кодонная оптимизация, генная терапия. Дисферлинопатии относят к нейромышечным заболеваниям человека аутосомно-рецессивного типа наследования при которых происходит нарушение экспрессии и(или] функции белка дисферлина в скелетной мышце. Дисферлин — трансмембранный белок, который содержит семь С2 доменов и состоит из 2Q80 аминокислот [231 кДа). Мутации в любом из пяти С2 доменах дисферлина (С2А, В, , Е и G) могут привести к формированию аномальной трёхмерной структуры белка или к его деградации, что служит причиной развития мышечной дистрофии. С2А области дисферлина связывают фосфолипиды Саг+-зависимым способом., что, по-видимому, связано с ролью белка в восстановлении мембран скелетных мышц. Мутациями в гене dysf, находящимся в хромосоме 2р12-14, обусловлено развитие конечностно-поясной миодистрофии типа 2В и миопатии Миоши. Ген dysf охватывает более 150 тыс. пар нуклео-тидов [т.п.н.) геномной ДНК и состоит из 55 экзонов . На интронном уровне обнаружено более 300 различных мутаций, большинство из которых представляют собой однонуклеотидные полиморфизмы .Возможность восстановления дефектного белка мышц путем введения в клетку функционального гена дикого типа является перспективным методом генной терапии мышечных дистрофий. В настоящее время генную терапию на основе аденовирусов считают возможным методом лечения различных заболеваний человека, в том числе мышечных дистрофий.Аденовирусные векторы способны инфицировать широкий спектр клеток человека, обеспечивая высокий уровень экспрессии трансгена, не интегрируются в геном клетки хозяина [онкологическая безопасность) и могут переносить большие фрагменты рекомбинантной ДНК Сдо 7,5 т.п.н.). Целью работы явилось создание рекомбинантного аденовируса, кодирующего кодон-оптимизированный ген дисферлина человека, и анализ экспрессии рекомбинантного белка в культуре клеток in vitro. Выбор аденовирусного вектора обусловлен большим размером кодон-оптимизированной нуклеотидной последовательности гена dysf.

Авторы:

Издание: Клеточная трансплатология и тканевая инженерия
Год издания: 2012
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2012.-N 3.-С.25-28. Библ. 20 назв.
Просмотров: 148