Генный перенос в опухолевые клетки с помощью новых комплексов кардиолипиноподобных дикатионных липидов и плазмидной ДНК

Аннотация:

Липидные везикулы бисамфифилов кардиолипиноподобных дикатионных липидов (КДЛ) 1-1V исследованы для получения липоплексов с плазмидными ДНК разных размеров для генного переноса в целях генотерапии. Размеры (300± 100 нм) и стабильность (> 2 ч) липоплексов КДЛ оказались достаточны для использования в переносе генов в монослойные и суспензионные культуры клеток. Общая цитотоксичность по МТТ-тесту КДЛ оказалась ниже, чем у контрольной группы (липофектин). Оптимизированы условия трансфекции линий опухолевых клеток липоплексами бисамфифилов КДЛ и плазмидных ДНК. Наиболее эффективной трансфекция для липоплексов «КДЛ — плазмидная ДНК» умазалась при соотношении липид-ДНК (1/D) равном 5 (для липофектина при 2). Для монослойных культур клеток липоплексы КДЛ-1 сравнимы по эффективности трансфекции с липофектином, а в случае суспензионной культуры их эффективность на 50% ниже. Это позволяет использовать их в качестве медиаторов для переноса генетических конструкций в опухолевые клетки человека. Одной из наиболее распространенных невирусных систем переноса терапевтических генов в целях генотерапии являются катионные (фосфо)липидные везикулы (липосомы] . ДНК спонтанно связывается с катионными липосомами, нейтрализуя свой отрицательный заряд, а образующиеся при этом комплексы — липоплексы — взаимодействуют с клеточной мембраной, интернализуются в клетку. Таким способом — липофекцией — могут быть транс-фицированы большинство клеточных линий. Наиболее важен для интернализации липоплексов Сгено-сом) в клетку процесс адсорбционного эндоцитоза.В экспериментах in vitro показано, что чем больше размер геносом (200—400 нм), тем выше эффективность трансфекции. Для экспериментов in vivo имеет место обратная ситуация. Необходимо, чтобы липоплексы были стабильны в биологических средах, поскольку нестабильность комплексов in vivo могла бы приводить к закупорке капилляров. Возрастающий интерес к активности липоплексов на основе дикатионных поверхностных агентов обусловлен их необычными физико-химическими свойствами, отличающимися от мономерных аналогов . Целью работы являлось создание липоплексов на основе бисамфифилов кардиолипиноподобных дикатионных липидов [КДЛ] и плазмидной ДНК, анализ их размеров и стабильности, а также эффективности генного переноса в монослойные и суспезионную культуры клеток. Описанные в работе липидные везикулы и липоплексы характеризовались устойчивостью к агрегации, субмикронными размерами и относительной нетоксичностью КДЛ в экспериментах in vitro, что позволит использовать их для переноса терапевтических генов в опухолевые клетки человека

Авторы:

Издание: Клеточная трансплатология и тканевая инженерия
Год издания: 2012
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2012.-N 3.-С.57-61. Библ. 21 назв.
Просмотров: 56