Улучшение доставки комплексов плазмидной ДНК с поликатионом в клетки человека в присутствии блоксополимеров этилен -и пропиленоксида

Аннотация:

Работа посвящена исследованию влияния новых блоксополимеров этилен- и пропиленоксида на доставку плазмидной ДНК и ее комплексов с катионными полимерами в клетки человека. В качестве систем доставки протестированы трехфункциональные амфифильные блоксополимеры на основе глицерина (лапролы), полиэтиленимин (25 кДа) и коммерческий трансфекционный реагент TurboFect. Установлено, что TurboFect образует более компактные и положительно заряженные полиплексы с плазмидной ДНК lpEGFP-N2] и обеспечивает большую экспрессию GFP в клетках HEK 293, чем полиэтиленимин. Лапролы слабо взаимодействуют с плазмидной ДНК и не улучшают ее внутриклеточную доставку, однако существенно усиливают трансфекцию клеток комплексами ДНК с полиэтиле-нимином. Результаты показывают, что лапролы обладают умеренной цитотоксичностью и представляют интерес для доставки геннотерапевтических препаратов в клетки. Ключевые слова: плазмидная ДНК, полиплексы, полимерные носители, блоксополимеры этилен- и пропиленоксида, генная терапия. Разработка эффективных систем доставки генетического материала является актуальной задачей клеточной биологии и генной терапии. В настоящее время в качестве геннотерапевтических векторов тестируют различные вирусы, которые, несмотря на эффективность трансформации клеток, обладают высокой иммуно- или туморогенностью.Значительно более безопасной системой являются препараты на основе плазмидной ДНК, отличающиеся низкой себестоимостью, но, вместе с тем, характеризующиеся низкой эффективностью доставки терапевтических генов. Для улучшения трансфекции клеток плазмидной ДНК общепринятым подходом является ее связывание с катионными липидами и полимерами. Эти вещества образуют компактные комплексы с нуклеиновыми кислотами, облегчая внутриклеточный перенос генов, их высвобождение из лизосом и защиту от расщепления нуклеазами. Фундаментальным недостатком катионных липидов/полимеров является их высокая токсичность, обусловленная, в частности, мембраноповреждающим действием. Перспективным классом полимерных носителей генов являются амфифильные полимеры, такие как блоксополимеры этилен- и пропиленоксида. К настоящему времени подробно исследованы свойства двухфункциональных блоксополимеров, известных под торговой маркой Плуроники (Pluronics, BASF). В зависимости от физико-химических свойств Плуроники способны оказывать различные биологические эффекты, в том числе, модулировать активность систем мембранного транспорта и усиливать доставку лекарственных средств в резистентные опухолевые клетки и клетки гематоэнцефалического барьера . Показано, что Плуроник Р85 усиливает пролиферацию и остеогенную дифференцировку мезенхимных стволовых клеток человека.Зафиксировано повышение уровня экспрессии маркерных генов в клетках человека при трансформации невирусными векторами , аденовирусами и лентивирусами в присутствии Плуроников. Обнаружено, что Плуроники F127, L61 и Р85 повышают уровень трансфекции при инъекции «голой» плазмидной ДНК в скелетную мышцу. Настоящая работа посвящена исследованию возможности применения трехфункциональных блоксополимеров этилен- и пропиленоксида на основе глицерина для доставки плазмидной ДНК в клетки человека.

Авторы:

Издание: Клеточная трансплатология и тканевая инженерия
Год издания: 2012
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2012.-N 3.-С.101-104. Библ. 15 назв.
Просмотров: 117