Создание рекомбинантных аденовирусов и лентивирусов, экспрессирующих ангиогенные и нейропротекторные факторы, с помощью технологии клонирования Gateway

Аннотация:

Важной задачей генной и генно-клеточной терапии является поиск оптимального вектора — переносчика генетической информации. Вирусы представляют собой естественную биологическую систему переноса генов в эукариотические клетки. Одними из наиболее эффективных и доступных векторов для доставки рекомбинантных нуклеиновых кислот в клетки являются адено- и лентивирусы. В настоящем исследовании с помощью системы Gateway-клонирования нами были сконструированы аденовирусные и лентивирусные векторы, кодирующие ангиогенные и нейропротекторные факторы: изоформы сосудистого эндотелиального фактора роста vegf121, vegf165, vegf189; основной фактор роста фибробластов fgf2; глиальный нейротрофический фактор gdnf. Эффективность трансдук-ции клеток линии НЕК293А полученными генетическими конструкциями и экспрессия рекомбинантных белков подтверждены методом иммунофлуоресцентного анализа. Ключевые слова: аденовирусы, лентивирусы, Gateway-клонирование, сосудистый эндотелиальный фактор роста, основной фактор роста фибробластов, глиальный нейротрофический фактор. Большинство нейропротекторных стратегий, направленных на предотвращение гибели нейронов при нейродегенеративных заболеваниях, после ней-ротравм и ишемических инсультов недостаточно эффективны и не приводят к полному функциональному восстановлению больного. При этом ситуация осложняется недоступностью нейропротекторных лекарственных веществ в клинике . К природным нейропротекторным агентам относят нейротрофические факторы (NGF, BDNF, CNTF, GDNF, NT-3/4), эффективно поддерживающие выживание нейронов в патологических условиях и стимулирующие нейрорегенерацию [2]. Особого внимания заслуживают и другие ростовые факторы. В многочисленных исследованиях установлено выраженное нейропротекторное действие IGF, FGF и VEGF при нейродегенеративных заболеваниях, травме спинного мозга, ишемии головного мозга . Повышенный интерес к VEGF обусловлен как его ангиогенным, так и нейропротекторным действием. Одной из ключевых задач разработки «инструментов» для генной терапии является создание экспрес-сионных генетических конструкций, обеспечивающих перенос рекомбинантных генов в целевые клетки in vitro и in vivo. Идеальная векторная система в генной терапии не требует инвазивных методов доставки, ограничена действием только на клетки-мишени, обеспечивает экспрессию известного количества трансгенных продуктов в течение определенного периода времени. Аденовирусы являются одними из наиболее часто применяемых векторов в генной терапии, уступая только ретровирусам. Перспективными в разработке методов генной терапии также считаются векторы на основе лентивирусов. Лентивирусы, как и аденовирусы, способны инфицировать различные клетки. В то же время, за счет интеграции в геном клетки-хозяина они обеспечивают долговременную экспрессию и передачу трансгена дочерним клеткам при делении.

Авторы:

Издание: Клеточная трансплатология и тканевая инженерия
Год издания: 2012
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2012.-N 3.-С.164-168. Библ. 11 назв.
Просмотров: 106