МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗОЛЯТОВ БРУЦЕЛЛ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ СОБАК И ОЛЕНЕЙ В РАЗЛИЧНЬГХ РЕГИОНАХ РОССИИ

Аннотация:

Цель работы — сравнительная молекулярно-генетическая характеристика изолятов бруцелл, выделенных от собак и оленей в России, с использованием современных методов типирования. Изоляты от собак ( = 19) и оленей ( = 2) были изучены методом ПЦР с праймерами на видо- и биоварспецифические дифференцирующие мишени бруцелл и MLVA (multiple locus variable number tandem repeats analysis) с 12 парами праймеров на известные вариабельные локусы генома бруцелл. В ПЦР на дифференцирующие генетические мишени изоляты от собак были охарактеризованы как В. canis, а оленьи изоляты — как В. suis биовар 4. Метод MLVA-типирования изолятов показал 5 идентичных и 7 вариабельных локусов. Дендрограмма на основе данных MLVA-12-типирования объединила все изоляты в генетически родственный кластер вместе с референтными штаммами В. canis RM6/66 и В. suis 1330, Tomsen, 686. 40 биовары 1—4. Было выявлено 17 MLVA-генотипов у изолятов с индексом вариабельности Hunter and Gaston discriminatory index (HGDI) = 0.9842. Молекулярно-генетическая характеристика географически удаленных друг от друга российских изолятов В. canis и В. suis подтверждает существующее положение о близком генетическом родстве этих видов бруцелл. Вместе с тем методом MLVA показаны генетическое разнообразие этих изолятов и привязанность родственных генотипов к географическому региону первичного выделения. Для совершенствования системы эпидемиологического надзора за бруцеллезом в России необходимо проводить MLVA-типирование изолятов, выделяемых от собак и оленей, представляющих эпидемическую опасность для человека. Ключевые слова: бруцеллез, изоляты, Brucella canis, В. suis, идентификация, ПЦР, MLVA (multiple locus variable number tandem repeats analysis) Бруцеллез — особо опасная зоонозная инфекция, которую вызывают бактерии рода Brucella, способные передаваться от животных к человеку, нанося большой экономический ущерб . В последние годы бруцеллез собак, вызываемый видом Brucella canis, приобретает важное эпизоотическое и эпидемиологическое значение в мире . Бруцеллез собак встречается даже в тех странах (Япония, Норвегия, Великобритания, Германия, Чехословакия и др.), где не регистрируют бруцеллез у других видов животных .Изоляты этого потенциально патогенного для человека вида бруцелл выделяют в разных регионах России от больных собак с 1994 г.. До настоящего времени российские изоляты не характеризовались с помощью современных молекулярно-генетических методов , а эпидемиологическая значимость бруцеллеза собак не изучена. Бруцеллез северных оленей вызывается высокопатогенным для человека видом В. suis биовар 4, распространенным в полярных районах Аляски, Канады и Сибири .Бруцеллез у домашних и диких северных оленей широко распространен в Восточной Сибири (Ямало-Ненецкий, Таймырский и Эвенкийский автономные округа), на Дальнем Востоке (Чукотка и Камчатка) и является тормозящим фактором дальнейшего развития оленеводства. В последние десятилетия эпизоотическая и эпидемическая обстановка по бруцеллезу в России ухудшилась в связи с сокращением объемов серологических и бактериологических исследований среди животных и людей, ослаблением ветеринарно-санитарного контроля и образованием новых частных хозяйств .Система противоэпидемических мероприятий по контролю и борьбе с бруцеллезом включает выявление источника инфекции, выделение чистой культуры с проведением как видовой идентификации возбудителя, так и штаммовой дифференциации. Изоляты различных видов бруцелл, выделяемые в регионах России, характеризуют в основном фенотипически-ми методами, не позволяющими выявлять их внутривидовые особенности и связывать с территориями эпидемиологического неблагополучия по бруцеллезу .Решение этой проблемы видится в использовании современных методов молекулярно-генетиче-ского типирования изолятов бруцелл. Молекулярно-генетическая характеристика изолятов бруцелл, выделяемых от различных природных хозяев, позволяет получать новые данные о генетическом родстве и разнообразии разных видов бруцелл, систематизировать возбудителей бруцеллеза в каталоги, сравнивать с существующими международными базами данных, что в итоге приводит к совершенствованию системы эпидемиологического надзора за бруцеллезной инфекцией в нашей стране. При полном секвенировании ряда геномов патогенных видов бруцелл выявлены уникальные видо-специфические инсерции и делеции в геномах каждого вида , что позволяет использовать их в качестве мишеней в ПЦР для идентификации видов и биоваров бруцелл . Для дифференциации изолятов внутри одного вида и выявления их родственных связей успешно применяют метод MLVA (multiple locus variable number tandem repeats analysis) . Метод основан на сравнительном анализе локусных вариабельных тандемных повторов возбудителя в ПЦР с использованием праймеров, ограничивающих вариабельные локусы 1-й и 2-й хромосом бруцелл . Метод MLVA отражает генетический полиморфизм у штаммов бруцелл одного вида, связанный с разным числом копий повторов в локусах. Преимущества этого метода перед существующими методами SNP (single nucleotide polymorphism) и MLST (multiple loci sequence typing) при типировании изолятов патогенных видов бруцелл заключаются в низкой стоимости анализа и высокой разрешающей способности. MLVA широко используется в странах Европейского континента , Северной и Южной Америки , Азии для молекулярного типирования изолятов бруцелл разных видов, а также для дифференциации вакцинных штаммов В. abortus 82 и 75/79-АВ от полевых изолятов . Этот метод позволяет производить дифференциацию возбудителя бруцеллеза на уровне штаммовых различий, что дает возможность устанавливать источник инфекции,

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2012
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2012.-N 4.-С.28-33. Библ. 35 назв.
Просмотров: 286