Натрий-йодидный симпортер как репортерныи белок в разработке генотерапевтических препаратов

Аннотация:

Генотерапия является одним из перспективных направлений в создании противоопухолевых препаратов. При разработке генотерапевтических противоопухолевых препаратов важно добиться экспрессии терапевтических генов, ограниченной опухолевыми клетками. В связи с этим существует проблема детекции продуктов терапевтических генов в рамках всего модельного организма. Натрий-йодидный симпортер (NIS) — трансмембранный белок, осуществляющий перенос йодид-ионов внутрь клеток. Ранее было показано, что доставка гена NIS в клетки различного происхождения обеспечивает эффективное концентрирование йодид-ионов, использование радиоактивных изотопов йода позволяет детектировать N IS-синтезирующие клетки в организме лабораторных животных любого размера. Представляется перспективной разработка генетической системы на основе гена NIS, позволяющей определять локализацию клеток, получивших и экспрессирующих гены в составе ге-нотерапевтического агента. Материалы и методы исследования. Нами клонирована кДНК гена rNIS из щитовидной железы серой крысы. На базе полученной последовательности получены экспрессионные конструкции, содержащие последовательность rNIS под контролем различных эука-риотических промоторов: сильного конститутивного промотора цитомегаловируса (pCMV), меланомоспецифического регуляторного элемента состоящего из трех энхансеров гена тирозиназы мыши, и промотора гена MIA человека. На линиях клеток меланомного происхождения МЗ (меланома мыши) и А375 (меланома человека) показано, что транзиентная трансфекция экспрессионными конструкциями с геном rNIS приводит к образованию функционально активного белка. В экспериментах in vitro трансфицированные геном rNIS клетки поглощали как минимум на порядок больше радиоактивного йодида из среды по сравнению с контрольными клетками. При этом добавление в среду специфического ингибитора NIS, перхлората натрия, снижало поглощение радиойодида трансфицированными клетками до уровня контрольных клеток. На линиях клеток меланомного происхождения МЗ и А375 проведено сравнение генетических конструкций, содержащих rNIS под контролем различных промоторов. Показано, что трансфекция клеток обеих линий конструкцией, содержащей rNIS под контролем мелономоспецифического регуляторного элемента, обеспечивает высокий уровень активности симпортера, сопоставимый с уровнем активности, обеспечиваемым конститутивно активным промотором цитомегаловируса (CMV).

Авторы:

Издание: Медицинский академический журнал
Год издания: 2012
Объем: 2с.
Дополнительная информация: 2012.-N 3.-С.74-75. Библ. 0 назв.
Просмотров: 405