ИДЕНТИФИКАЦИЯ САЙТОВ ФОСФОРИЛИРОВАНИЯ АМИНОГЛИКОЗИДФОСФОТРАНСФЕРАЗЫ VIII Streptomyces rimosus

Аннотация:

Впервые определена функция фосфорилирования в регуляции активности ферментов, инактивирующих аминогликозидные антибиотики. Показано, что аминогликозидфосфотрансфераза APHVII1 штамма актинобактерий Streptomyces rimosus АТСС 10970 является представителем группы ферментов, активируемых протеинкиназами. Установлено, что два остатка серина в молекуле APHVIII могут фосфорилироваться протеинкиназами из экстракта устойчивого к канамицину штамма S. rimosus 683 (производного штамма АТСС 10970). Методами направленного мутагенеза и молекулярного моделирования обнаружено, что ключевым для модуляции активности APHVIII является Са2+-зависимое фосфорилирование по остатку Serl46 в активационной петле фермента. Сравнительный анализ канамицинкиназной активности нефосфорилированной и фосфорилированной форм исходного и мутантных вариантов APHVIII белка показал, что модификация Serl46 в APHVIII приводит к 6—7-кратному увеличению канамицинкиназной активности APHVIII. Следовательно, Ser146 в активационной петле APHVIII критичен для активности фермента. Пропорционально возрастает и уровень устойчивости бактериальной клетки к канамицину. На практике полученные результаты расширяют перспективы создания высокоэффективных тест-систем для отбора ингибиторов серин/треониновых протеинкиназ (СТПК) на основе конструктов APHVIII белка и соответствующих СТПК человека и бактерий.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2012
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2012.-N 11.-С.1504-1512. Библ. 36 назв.
Просмотров: 55