ВЛИЯНИЕ СТРУКТУРЫ ХРОМАТИНА, АНТИБИОТИКОВ И ЭНДОГЕННОГО МЕТИЛИРОВАНИЯ ГИСТОНОВ НА ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ ГИСТОНОВ HI И НЗ В ПРИСУТСТВИИ ПРОТЕИНКИНАЗЫ А В ЯДРАХ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ in vitro

Аннотация:

Гистоны — ядерные белки, образующие вместе с фрагментом ДНК определенной длины основную фундаментальную структурную единицу хроматина — нуклеосому . Так называемые кор-гистоны: НЗ, Н4, Н2А и Н2В (по две молекулы каждого) — образуют ядро нуклеосомы (кор-частицу). Гистон H1 связан с линкерами — участками ДНК, соединяющими соседние кор-частицы и считается ответственным за образование наднуклеосомных структур хроматина, сложная многоуровневая и гетерогенная организация которого во многом еще недостаточно изучена.Все гистоны эукариот состоят из консервативной глобулярной области и примыкающих к ней неструктурированных N- и С-концов. Эти концы подвергаются нескольким посттрансляционным ковалентным модификациям, включающим фосфорилирование, ацетилирование, метилирование и т.д. Согласно гипотезе «гисто-нового кода» , различные подтипы гистонов и их модификации являются тем самым инструИзучено фосфорилирование гистонов HI и НЗ ц-АМФ-зависимой протеинкиназой А и эндогенными фос-фокиназами в присутствии [гамма-32Р)-АТР in vitro в изолированных ядрах печени крысы с разным уровнем структурной организации хроматина: конденсированным (диаметр фибрилл 100—200 нм; Я-1) и частично деконденсированным (диаметр фибрилл ~30 нм; Я-2). В Я -1 гистон Н1 фосфорилируется в ~2 раза больше гистона НЗ. При разворачивании хроматина до Я-2 суммарное фосфорилирование HI уменьшается в 1,5 раза, а НЗ не меняется, хотя эндогенное фосфорилирование обоих гистонов снижается вдвое. Изменения в фосфорилировании гистонов под действием низких и высоких концентраций дистамицина и хромомици-на отличаются для HI и НЗ в Я-1 и Я-2. Обнаружено, что дистамицин увеличивает фосфорилирование прочносвязанной фракции HI, не экстрагируемой полиглутаминовой кислотой, особенно в Я-1. Хромоми-цин увеличивает фосфорилирование обоих гистонов и в экстрактах полиглутаминовой кислоты, и в ядерных осадках (особенно сильно в Я-2). При этом в Я-1 фосфорилируется прочносвязанная фракция гистонов HI, N-концы которых расположены на АТ-богатых сайтах, доступность к которым для протеинкиназы теряется при разворачивании хроматина до Я-2. В то же время, в Я-2 резко увеличивается доступность для протеинкиназы прочносвязанной фракции гистонов HI, /V-концы которых расположены на ГЦ-богатых сайтах. Высокие концентрации как хромомицина, так и дистамицина стимулируют фосфорилирование в Я-1 и Я-2 неэкстрагируемой полиглутаминовой кислотой фракции Н1, /V-концы которых расположены на сайтах, где АТ-ГЦ. Хромомицин в высокой концентрации увеличивает в 4—7 раз фосфорилирование небольшой фракции НЗ, которая выходит в экстракт полиглутаминовой кислоты в обоих типах ядер. Обнаружено влияние эндогенного метилирования гистонов HI и НЗ в ядрах на их последующее фосфорилирование в зависимости от структуры хроматина, прочности связи гистонов и концентрации дистамицина.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2013
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2013.-N 2.-С.243-253. Библ. 35 назв.
Просмотров: 55