НЕЙРОМОДУЛЯТОР SLURP-1 ЧЕЛОВЕКА: БАКТЕРИАЛЬНАЯ ПРОДУКЦИЯ, ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С МЫШЕЧНЫМ НИКОТИНОВЫМ АЦЕТИЛХОЛИНОВЫМ РЕЦЕПТОРОМ, СТРУКТУРА И КОНФОРМАЦИОННАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ В РАСТВОРЕ

Аннотация:

Никотиновый ацетилхолиновый рецептор (нАХР) является лигандозависимым ионным каналом . В зависимости от локализации нАХР подразделяют на два больших класса: нейро-нальные и мышечные, которые, в свою очередь, включают в себя более десяти различных подтипов . В последнее время появились данные о локализации некоторых подтипов нАХР в эпителиальной и легочной ткани и о вовлечении этих рецепторов в функционирование иммунной и эндокринной систем организма.С дисфункциями нАХР связаны возникновение и развитие множества заболеваний нервной и мышечной систем, таких как болезнь Альцгеймера, паркинсонизм, мышечная дистрофия, эпилепсия, депрессия, никотиновая и алкогольная зависимости, а также, возможно, развитие ряда онкологических заболеваний и заболеваний иммунной и эндокринной систем . Представлены данные по экспрессии гена эндогенного нейромодулятора человека SLURP-1, действующего на никотиновые ацетилхолиновые рецепторы, и принадлежащего к семейству белков Ly-6/uPAR. Созданы конструкции для цитоплазматической продукции SLURP-1 в клетках Е. coli в виде слитной полипептидной цепи с тиоредоксином и для секреции с лидерным пептидом STII. Однако получить SLURP-1 в миллиграммовых количествах удалось только в составе цитоплазматических телец включения. Опробованы различные подходы для ренатурации нейромодулятора. Получены миллиграммовые количества рекомбинантного SLURP-1 и его15N-меченого аналога. Показано, что в микромолярных концентрациях SLURP-1 конкурирует с |125I]-а-бунгаротоксином за связывание с мышечным никотиновым ацетилхолиновым рецептором из Torpedo californica. Полученные результаты указывают на возможное перекрывание сайтов связывания нейромодулятора и а-нейротоксинов на поверхности нАХР. Методом ЯМР-спектроскопии установлено, что в водном растворе присутствуют две равнозаселенные структурные формы SLURP-1. Показано, что конформационная гетерогенность в молекуле нейромодулятора вызвана цис-транс изомерией пептидной связи Туг39-Рго40, и характерное время обменного процесса между двумя формами составляет ~4 мс. Получено отнесение 'Н и 15NЯМР сигналов, и определена вторичная структура обеих структурных форм SLURP-1. Согласно полученным данным, структура нейромодулятора включает в себя два антипараллельных бета-листа, состоящих из пяти бета-тяжей и имеет близкое сходство со структурами трехпетельных нейротоксинов яда змей.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2013
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2013.-N 2.-С.276-285. Библ. 27 назв.
Просмотров: 76