ХАРАКТЕРИСТИКА ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ПРОТЕАСОМ И АССОЦИИРОВАННЫХ С НИМИ БЕЛКОВ МЕТОДОМ iTRAQ-MACC-CПEKTPOMETPИИ

Аннотация:

Проведен iTRAQ-масс-спектрометрический анализ внеклеточных протеасом и выявлены постгранс-ляцнонные модификации (ПТМ) субъединиц внеклеточных 26S протеасом. Выявлены новые сайты убиквитинирования и ацетилирования протеасомных субъединиц альфа2 (К196), альфа4 (К189 и К234), альфа6 (К217) и Rpn6 (А2). Обнаружено, что в составе внеклеточных протеасом присутствует стандартный набор из субъединиц 26S протеасомы, а также регулятор РА200, который, как полагали ранее, локализуется лишь в ядре клеток. Получен первичный скрининг белков, взаимодействующих с внеклеточными протеасомами. Показано, что с протеасомами ассоциированы белки, участвующие в таких основных клеточных процессах, как транскрипция, репарация ДНК, трансляция, а также белки цитоскелета и убиквитин-протеасомной системы (УПС). Методом иммуноблотинга подтвердили взаимодействие протеасом с девятью белками, выбранными из полученного белкового скрининга случайным образом. Ключевые слова: внеклеточные протеасомы, iTRAQ-масс-спектрометрия, посттрансляционные модификации, убиквитинирование. Убиквитин-протеасомная система (УПС) осуществляет программированный протеолиз и процессинг различных регуляторных белков, участвующих во множестве клеточных процессов, включая регуляцию транскрипции, репарацию ДНК, продвижение клетки по клеточному циклу, иммунный ответ, апоптоз (Konstanti-nova etal., 2008; Моисеева и др., 2010а; Цимоха, 2010). Протеолитическим «ядром» этой системы является муль-тисубъединичный белковый комплекс — 26S протеасома, часто называемый просто протеасома. 26S протеасома состоит из протеолитической коровой частицы (20S протеасомы) и одного или двух 19S регуляторов. 20S протеасома представляет собой полый цилиндр, образованный четырьмя семичленными кольцами: два внутренних кольца собраны из субъединиц бета-типа, два внешних — из субъединиц альфа-типа. Три бета-субъединицы (Р1, р2 и Р5) ответственны за протеолитическую активность протеасом; основной функцией альфа-кольца является регулирование доступа субстрата в протеолитическую камеру 20S протеасомы и взаимодействие с 19S регуляторными комплексами (и другими регуляторами), а также с другими белками, которые, согласно литературным данным, взаимодействуют с протеасомами в случае убиквитин-независимого протеолиза.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2013
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2013.-N 2.-С.111-121. Библ. 36 назв.
Просмотров: 72