МЕМБРАНОСВЯЗАННЫЕ ПРОТЕАЗЫ ОМРТ+ И ОМРТ- ШТАММОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА

Аннотация:

Выявление протеаз в наружных мембранах (НМ) отрТ+ и ompT-штаммов холерного вибриона 01 и 0139 серогрупп. Специфически стерильные препараты Н М получали лизисом живых клеток холерных вибрионов 4,5 М раствором мочевины с последующим дифференциальным центрифугированием и обработкой нуклеазами. Экстракцию белков НМ, предварительно обработанных саркозинатом натрия, проводили Тритоном Х-100 в присутствии ЭДТА. Протеазный и полипептидный спектры изучали в субстратном и SDS-электрофорезе. Чувствительность протеаз к ингибиторам определяли в диффузионном тесте в агарозном геле, содержащим субстрат, с использованием соевого ингибитора трипсина (СИТ) и фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ). Наличие гена ompT определяли в ПЦР с использованием специфических праймеров. По данным ПЦР 13 штаммов Vibrio cholerae 01 и 3 штамма V. cholerae 0139, выделенные из клинического материала, а также 22 штамма V. cholerae 01, изолированные из объектов окружающей среды, содержали ген ompT. Два штамма V. cholerae 01, выделенные от человека, 9 штаммов V. cholerae Ol и 2 штамма V. cholerae 0139, выделенные из окружающей среды, не имели ompT гена. С помощью ДСН- и энзим-электрофореза в полиакриламидном геле обнаружены количественные и качественные различия в составе полипептидов и протеаз, гидролизующих желатин, казеин и протаминсульфат, НМ отрТ+ и ompT- штаммов холерных вибрионов. Ингибирование экстрактов НМ ФМСФ и СИТ приводило к снижению их протеолитической активности. В препаратах и экстрактах НМ отрТ+ и ompT- V. cholerae обнаружено до трех протеаз, часть из которых может быть отнесена к омптиноподобным.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2013
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2013.-N 2.-С.3-12. Библ. 21 назв.
Просмотров: 88