НОВЫЕ НАДФН- СПЕЦИФИЧНЫЕ L-АСПАРТАТ ДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ МЕЗОФИЛЬНЫХ АЗОТФИКСИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ Rhodopseudomonas palustris И Bradyrhizobium japonicum

Аннотация:

Гены предполагаемых L-аспартат дегидрогеназ (КФ 1.4.1.21, АДГ) из мезофильных азотфиксирующих бактерий Rhodopseudomonas palustris и Bradyrhizobium japonicum были клонированы и экспрессированы в Escherichia coli. Соответствующие ферменты, в виде гибридных белков с N-концевой гексагиcтидиной меткой, были очищены до гомогенного состояния. Оба фермента in vitro катализировали восстановительное аминирование оксалоацетата до L-аспартата на порядок быстрее, чем обратную реакцию при соответствующих оптимальных рН 8.0-9.0 и 9.8; при этом ферменты катализировали только аминирование при физиологических условиях (рН 7.0-8.0). Их специфичность к НАДФН была на 1—2 порядка больше, чем к НАДН. Значения кажущихся констант Км по оксалоацетату, аммонию и НАДФН при рН 9.0 для АДГ из R. palustris составили 9.2, 11.3 и 0.21 мМ соответственно, адля АДГ из В. japonicum — 21,4.3 и 0.032 мМ. Аминирующая активность новых АДГ может быть важна для фиксации неорганического азота in vivo и использована для создания бактериального штамма-продуцента L-аспартата методами метаболической инженерии.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2013
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2013.-N 2.-С.155-163. Библ. 31 назв.
Просмотров: 152