ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА РЕКОМБИНАНТНОГО "УСЕЧЕННОГО" ЦИТОХРОМА Р450 2В4,ЭКСПРЕССИРОВАННОГО В КЛЕТКАХ E.coli В СОСТАВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА С ГЛУТАТИОН-S-ТРАНСФЕРАЗОЙ

Аннотация:

Описывается модификация метода Coon и Pernecky получения очищенного препарата рекомбинантного "усеченного"цитохрома Р450 2В4, экспрессированного в клетках E.coli в составе слитого белка с глутатион-S-трансферазой. Модификации метода касались условий реакции протеолиза химерного белка тромбином, удаления примесей этой протеазы из очищенных препаратов цитохрома путем колоночной хроматографии на оксиапатите, введения этапа получения сферопластов с использованием лизоцима, условий стабилизации фермента в процессе очистки и хранения. Препарат рекомбинантного цитохрома получен с выходом 20% и уд.со держанием цитохрома Р450 около 14,5 нмоль/мг белка. Метод перспективен для препаративного выделения высокоочищенных препаратов цитохрома Р450, необходимых для изучения структурно-функциональных взаимоотношений этого гемопротеина с белками-партнерами и исследования его структуры и механизма действия.

Авторы:

Издание: Вопросы медицинской химии
Год издания: 1999
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 1999.-N 1.-С.24-29
Просмотров: 37