МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АПОПТОЗА СПЕРМАТОЗОИДОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

Аннотация:

Важная роль в регуляции сперматогенеза принадлежит процессу программируемой гибели клетки - апоптозу, который может являться причиной нарушения фертильности, а также низкого процента оплодотворения при выполнении вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Процесс апоптоза сопровождается стадиеспецифическими изменениями морфологии и биохимии клетки, что используют для его оценки. Именно на особенностях протекания разных стадий апоптоза (индукторный, эффекторный этап или этап деградации) основаны методики его определения. Предпочтение тому или иному методу отдают в зависимости от целей исследования (выявление ранней или поздней стадии апоптоза, динамика развития, фармакологический скрининг и пр.), возможностей методического арсенала, технической базы лаборатории и в значительной мере финансовых затрат. Чаще всего в исследованиях как теоретического, так и прикладного плана возникает потребность только в идентификации апоптотических клеток, т. е. в документации апоптоза . Методы выявления апоптотирующих сперматозоидов можно разделить на 3 группы: выявление морфологических изменений, свойственных апоптотирующей клетке; выявление изменений ДНК в апоптотирующих сперматозоидах; выявление структурно-биохимических изменений вне ядерного аппарата клетки. В настоящее время в клинико-лабораторной практике и при проведении научных исследований применяют разные способы документации апоптоза сперматозоидов. Одним из них является морфоструктурный анализ исследуемых клеток. При подсчете апоптотических клеток с применением морфологического теста протекающий в сперматозоидах процесс апоптоза устанавливают по ультраструктурным изменениям ядерного аппарата, а именно учитывают такие проявления апоптоза, как изменение плазматической мембраны, конденсация ядерного хроматина по периферии ядра, образование фрагментов ДНК с высокой молекулярной массой, образование апоптотических телец и др. Апоптотический процесс сперматозоидов, однако, имеет свои особенности, которые связаны с организацией ДНК и клетки в целом: это и специфический характер организации хроматина, и очень малый объем цитоплазмы и др. В связи с этим к недостаткам метода относится возникновение трудностей в определении и трактовке признаков, свидетельствующих о протекании апоптоза в сперматозоидах. Кроме того, морфологические и биохимические изменения при апоптозе происходят неодновременно. Морфологические изменения становятся видимыми только с началом необратимых изменений в ядре и вне ядерного аппарата клетки. Изменения на ранних стадиях можно выявить только с помощью дополнительных биохимических лабораторных методик . Наиболее оптимальным и перспективным методом для оценки апоптоза сперматозоидов следует признать цитофлюориметрический метод - проточную цитоме-трию (ПЦ) благодаря ее высокой информативности, статистической достоверности и доказательности результатов. ПЦ характеризуется объективностью показателей и высокой производительностью (исследование от 1 тыс. Проведена классифицикация и дана оценка существующим методам, используемым для документации апоптоза сперматозоидов. Раскрыта сущность методов выявления изменений ДНК апоптотирующих сперматозоидов (методы SCSA, TUNEL и Comet assay), сущность аннексинового метода, методов выявления изменения трансмембранного потенциала ... клеток, определения активности каспаз и степени экспрессии белков - регуляторов апоптоза. Обсуждены достоинства и недостатки этих методов.

Авторы:

Издание: Клиническая лабораторная диагностика
Год издания: 2013
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2013.-N 4.-С.3-8. Библ. 61 назв.
Просмотров: 232