СТРУКТУРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО РОСТОВОГО ДОМЕНА УРОКИНАЗЫ

Аннотация:

Активатор плазминогена урокиназного типа (uPA) является сериновой протеазой, которая переводит профермент плазминоген в протеолитически активную форму плазмин. Урокиназа синтезируется и секретируется в виде одноцепочечной молекулы, состоящей из N-концевого домена (GFD), крингл-домена (KD) и С-концевого протеолитического домена (PD). Структура ATF (фрагмент урокиназы, состоящий из GFD и KD) в свободном состоянии и в комплексе с рецептором урокиназы (uPAR, CD87), лишенным ГФИ-якоря, была изучена ранее методами ЯМР и рентгеноструктурного анализа. Согласно полученным данным, в структуре GFD выделяют две области, состоящие из бета-слоев, ориентированных перпендикулярно друг к другу. GFD-область, отвечающая за связывание с uPAR, расположена в подвижной омега-пeтлe, состоящей из семи аминокислотных остатков и соединяющей два тяжа антипараллельного бета-слоя. Методом точечного мутагенеза было показано, что укорачивание П-петли на одну аминокислоту приводит к неспособности GFD взаимодействовать с uPAR. В отличие от вышеупомянутых данных, мы не получили каких-либо признаков наличия участков бета-слоев в GFD в полученных нами образцах uPA как в свободном состоянии, так и в комплексе с uPAR. GFD представляется достаточно гибким и неструктурированным доменом, способным, тем не менее, к высокоспецифичному взаимодействию с uPAR как in vitro, так и в экспериментах с клеточными культурами. Для оценки вторичной структуры GFD урокиназы мы использовали круговой дихроизм, изменение флюоресценции триптофана при температурной денатурации белка и гетероядерную ЯМР-спектроскопию ATF, меченного 15N и 13С, в свободном состоянии и в комплексе с uPAR.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2013
Объем: 17с.
Дополнительная информация: 2013.-N 5.-С.675-691. Библ. 48 назв.
Просмотров: 52