Молекулярные технологии детекции возбудителя сибирской язвы посредством ПЦР различных форматов

Аннотация:

Точная идентификация бактерий Bacillus anthracis остается сложной задачей при идентификации возбудителя сибирской язвы на фоне близкородственных видов В. cereus и В. thuringiensis ввиду высокой степени подобия нуклеотидных последовательностей представителей группы Bacillus cereus sensu lato (Bacillus cereus s.l.), к которой принадлежат указанные микроорганизмы. В данном исследовании разработаны наборы праймеров и зонды для ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией для отличия бацилл В. anthracis от В. cereus и В. thuringiensis, а также наборы праймеров для стандартной ПЦР с электрофоретической детекцией. Для представителей группы Bacillus cereus s.l. проанализированы нуклеотидные последовательности генов rpoB,plcr и ssp, содержащихся в хромосомной ДНК, которые могут являться молекулярно-генетическими маркерами для их типирования. Мишенью для праймеров и зондов определен фрагмент гена ssp хромосомной ДНК, характеризующийся гексануклеотидной вставкой только у штаммов В. anthracis. Стандартная ПЦР с электрофоретической детекцией и разработанным набором праймеров позволяет надежно отличать бациллы В. anthracis от близкородственных видов В. cereus и В. thuringiensis. Использование ПЦР-РВ с зондами в форматах TaqMan и молекулярного маяка также дает возможность проводить точную идентификацию бацилл В. anthracis: сигнал флуоресценции для шпилечных проб в формате молекулярного маяка был положительным только для штаммов В. anthracis, а для других представителей группы Bacillus cereus s.l. — отрицательным. При использовании линейных проб TaqMan регистрировали высокоинтенсивный сигнал флуоресценции для всех изолятов В. anthracis и сигнал значительно более низкой интенсивности для других представителей группы Bacillus cereus s.l. Разработанные подходы могут быть полезными для клинических, эпидемиологических и эпизоотологических исследований.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2013
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2013.-N 3.-С.86-95. Библ. 35 назв.
Просмотров: 85