АНОМАЛИИ МИТОЗА В ИМАГИНАЛЬНЫХ ДИСКАХ DROSOPHILA MELANOGASTER, НЕСУЩИХ КОНСТРУКЦИЮ ГАШЕНИЯ ТРАНСКРИПЦИИ ОПУХОЛЕВОГО СУПРЕССОРА Dig

Аннотация:

Изучено влияние сайленсирующей конструкции UAS-RNAi-dlg, индуцированной крыловым драйвером 1096-Gal4, на митоз, цитокинез и текстуру ядра в крыловых имагинальных дисках. Конструкция представляет собой геномную инсерцию Р-элемента, содержащую UAS -промотор, который управляет сайленсирующим элементом. Последний представлен кодирующим участком гена dig и комплементарным к нему участком. Вместе они образуют шпильку на уровне РНК, считываемой с этого элемена (Di-etzl et al., 2007). Такая шпилечная РНК расщепляется эндогенным белком Dicer на несколько фрагментов РНК, которые в свою очередь залипают на мРНК гена dig. Далее эти комплексы расщепляются геномным Dicer, в результате чего мРНК dig распадается. Использование конструкции связано с изучением функции гена dig. С этого гена считывается 21 транскрипт. Конструкция UAS-RNAi-dlg инак-тивирует 14 транскриптов — RE, RH, RQ, RS, RG, RD, RL, RB, RK, RR, RT, RN, RA и RP — и не затрагивает 7 других — RO, RF, RI, RU, RJ, RC и RM. Это дает возможность изучить действие считываемых с гена белков, которые содержат гуанилат-киназный домен IPR008145, расположенный на С-конце белка. Наиболее значимые последствия инактивации гена dig проявились в аномальной реализации событий на выходе из митоза: в подавлении цитокинеза и образовании двуядерных клеток. Наблюдались и другие аномалии, приводящие к появлению анеуплоидных и полиплоидных клеток: трехполюсная анафаза, асинхронное расхождение сестринских хроматид к полюсам в анафазе, отставание отдельных хромосом и микроядра. Количественные измерения флуоресцентных сигналов анти-НЗ-р-антител и флуо-рохрома DAPI позволили выявить нарушения фазовой специфичности текстуры ядра на входе и выходе из митоза, нарушение согласованности между процессами, управляющими компактизацией хроматина, и процессами, регулирующими прохождение клеток по фазам митоза. По результатам исследования высказано предположение об инактивации микротрубочкового пути поляризации клеточного кортекса как наиболее вероятной причине патологического митоза и цитокинеза в имагинальных дисках Drosophila при инактивации гена dig. Ключевые слова: Dig, UAS-RNAi-dlg, драйвер 1096-Gal4, конфокальная микроскопия, митоз, цитокинез, текстура ядра.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2013
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2013.-N 6.-С.406-413. Библ. 28 назв.
Просмотров: 29