СИГНАЛЬНАЯ ПЕНТИДАЗА Escherichia coli СПОСОБНА УЗНАВАТЬ И РАСЩЕПЛЯТЬ СИГНАЛЬНУЮ АМИНОКИСЛОТНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНОЙ альфа-АМИЛАЗЫ ИЗ Bacillus licheniformis

Аннотация:

Ген альфа-амилазы из Bacillus licheniformis и его гомолог, не кодирующий сигнальную аминокислотную последовательность, были клонированы и экспрессированы в компетентных клетках Escherichia coli. Продуцируемые Е. соli рекомбинантные белки располагались в цитоплазме клеток-продуцентов в виде нерастворимых, но ферментативно активных цитоплазматических агрегатов. Экспрессия при низкой концентрации индуктора (0,01 мМ изопропил p-D-тиогалактопиранозид вместо 0,5 мМ) и при пониженной температуре (18° вместо 37°) приводила к продукции значительных количеств растворимого рекомбинантного фермента, находящегося в растворимом состоянии и расположенного во внеклеточной среде. Рекомбинантный белок, несущий сигнальную последовательность, в отличие от своего гомолога, не содержащего этой аминокислотной последовательности, мог экспортироваться из клеток-продуцентов во внешнюю среду. При этом, активность альфа-амилазы в культуральной среде нарастала постепенно во времени с начала индукции экспрессии. Методом масс-спектрометрии (MALDI-TOF MS), а также путем определения N-концевой последовательности очищенной рекомбинантной альфа-амилазы было установлено, что сигнальная пептидаза Е. coli расщепляет сигнальную последовательность между остатками Аlа28 и Аlа29 фермента-предщественника. Предполагается, что сигнальный пептид а-амилазы из В. licheniformis можно использовать для секреции различных рекомбинантных белков, которые экспрессируются и продуцируются с помощью Е. coli.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2013
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2013.-N 8.-С.1215-1221. Библ. 20 назв.
Просмотров: 52