Получение рекомбинантного экстраклеточного фрагмента рецептора 2-го типа фактора роста эндотелия сосудов и моноклональных антител к нему

Аннотация:

кДНК, кодирующая экстраклеточный фрагмент рецептора 2-го типа фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR2) с I-III иммуноглобулин-подобными доменами, была клонирована в экспрессирующую конструкцию рЕТ_32а. Иммуноблот-анализ показал, что полученный в прокариотической системе экспрессии рекомбинантный препарат VEGFR2, является иммунохимически идентичным нативному рецептору. Далее VEGFR2, применяли для иммунизации мышей линии BALB/c и получения антител к VEGFR2. Отбор гибридом, продуцирующих моноклональные антитела, осуществляли методами твердофазного ИФА, иммуноблоттинга и иммуноцитохимического анализа. Таким образом, была получена гибридома, продуцирующая моноклональные антитела к VEGFR2, которые селективно взаимодействуют как с рекомбинантным, так и с нативным экстраклеточным фрагментом рецептора. Основным рецептором опосредованной передачи сигнала является рецептор 2-го типа семейства тирозинкиназ (VEGFR2) с молекулярной массой 230 кД. Во взрослом организме VEGFR2 преимущественно экспрессируется эндотелиальными клетками, в которых локализуется на люминальной и аблюминальной мембране. Однако экспрессия VEGFR2 также описана в мегакариоцитах, опухолевых и гематопоэтических стволовых клетках. В тканях легкого, печени, почек и в жировой ткани взрослых мышей обнаружен VEGFR2, находящийся в конститутивно фосфорилированном состоянии. В нервной системе VEGF функционирует как нейротрофический фактор, участвуя в аксональном наведении и увеличивая клеточную выживаемость. Сигнальные пути, запускаемые VEGFR2, приводят к VEGF-опосредованной пролиферации клеток микроглии, астроцитов, нейрональных стволовых и Шванновских клеток. VЕGF/VЕGFR2-опосредованная трансдукция сигнала запускает ряд сигнальных путей (Akt, МАРК, PI3K), которые активируют регуляторные белки и транскрипционные факторы, инициирующие выживание, пролиферацию и миграцию эндотелиоцитов. Эти эффекты важны не только в период интенсивного роста сосудистой сети, но и необходимы для поддержания структурной целостности и нормального функционирования микрососудов.

Авторы:

Издание: Бюллетень экспериментальной биологии и медицины
Год издания: 2013
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2013.-N 9.-С.335-340. Библ. 14 назв.
Просмотров: 51