РАДИАЦИОННАЯ БИОЛОГИЯ СТРУКТУРНО РАЗНЫХ ГЕНОВ Drosophila melanogaster. СООБЩЕНИЕ 4. ГЕН black: СЕКВЕНИРОВАНИЕ "ТОЧКОВЫХ" МУТАНТОВ И РЕКОМБИНАЦИОННЫЕ МЕХАНИЗМЫ ИХ ОБРАЗОВАНИЯ

Аннотация:

Как нами было установлено ранее , картина радиомутабильности гена blak+ из линии D32 Drosophila melanogaster оказалась необычной в двух отношениях: 1) нейтроны деления более эффективно, чем гамма-излучение, индуцируют "точковые" мутации гена и 2) подавляющее большинство таких мутантов имеют изменения ДНК, не определяемые методом ПЦР (так называемые ПЦР+-мутанты). Для проверки гипотезы о том, что нейтроны индуцируют с более высокой эффективностью, чем гамма-излучение, наряду с крупными и мелкие структурные изменения ДНК, не детектируемые методом ПЦР, нами секвенирован ген blak у случайной выборки из 8 нейтрон-, 8 гамма-индуцированных и 3 спонтанных (из нестабильной линии D32) П ЦР+-мутантов. ДН К тест-аллеля blak1 и облучаемых диких аллелей blak+32 и blak+18 была также секвенирована в качестве контроля. Как показали результаты, blak1 имеет в отличие от дикого гена в положении +530 (экзон 1) делецию АТСС с инсер-цией ТАССТАСС, ведущую к сдвигу рамки считывания, а также 27 замен оснований в экзонах и ин-тронах гена. Далее, шесть гамма- и один нейтрон-индуцированный мутанты имели небольшие, ведущие к сдвигу рамки считывания, делеции/инсерции, включая случай трансверсии G —> Т, ведущей к стоп-кодону. Учитывая природу и размер этих изменений, их можно рассматривать как ошибки тех или иных, известных у Drosophila, репарационных систем (NHEJ, SSA, MMR), которые могут быть активны в ранней зиготе еще до первого (гономерного) деления. Новым и важным является тот факт, что три спонтанных, два гамма- и семь нейтрон-индуцированных мутантов имели ДНК blak1 ал-леля со всеми его мутационными изменениями. Эти данные показывают, что межаллельная рекомбинация (генная конверсия) является одним из основных путей репарации ЛПЭ-зависимых повреждений ДНК. В основе этого механизма может лежать активность нескольких, основанных на рекомбинации, репаративных систем (HR, SDSA, B/R), также функционирующих в ранней зиготе, но после гономерного деления. Существенно, что частота конверсионных событий у нейтрон-индуци-рованных мутантов в 3.5 раза выше, чем у гамма-индуцированных. Обсуждается генетическое значение радиационно-индуцированной конверсии в ядре зиготы, ведущей к восстановлению гомозиготно-сти по мутантному аллелю (reconstitution of homozygosity, ROH). Нейтроны, гамма-излучение, Drosophila, ген blak, "точковые"мутации, секвенирование, генная конверсия, восстановление гомозиготности (ROH).

Авторы:

Издание: Радиационная биология.Радиоэкология
Год издания: 2013
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2013.-N 4.-С.355-366. Библ. 27 назв.
Просмотров: 43