ВЛИЯНИЕ АМИНОКИСЛОТНЫХ ЗАМЕН В МОЛЕКУЛЕ БЕТА-ГЛЮКОЗИДАЗЫ ИЗ Thermotoga maritime НА ГИДРОЛИЗ ИЗОФЛАВОНОВЫХ ГЛИКОЗИДОВ СОИ, СТАБИЛЬНОСТЬ И КАТАЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

Аннотация:

Термостабильная р-глюкозидаза (TmBglA) из Thermotoga maritima — перспективный биокатализатор для получения изофлавоновых агликонов. Для эффективного гидролиза соевых изофлавоновых конъюгатов необходим поиск ферментов с высокой специфичностью к природным субстратам. Изучено влияние аминокислот, расположенных в агликонсвязывающем кармане с неконсервативными остатками специфичных фупп фермента, принадлежащего семейству 1 гликозидгидролаз (GH1), с использованием TmBglA (дикого типа) из Т. maritima и трех мутантных, в которых были произведены замены аминокислот — Ml-TmBglA, M2-TmBglA и MlM2-TmBglA. Три мутантных белка были экспрессированы в Escherichia соИ, выделены и охарактеризованы. Мутации привели к сдвигам в значениях оптимальной температуры, термостабильности, сужению кривой рН-зависимости в результате удаления ионизированной боковой цепи. Все мутации снижали эффективность катализа, по отношению к природным субстратам, таким как гликозид салицина, по сравнению с синетическим р-нитрофенил-Р-О-глюкопиранозидом. Это свидетельствует о том, что замененные аминокислоты являются ключевыми, определяющими специфичность к агликону. Меньшая степень гидролиза генистеина и даидзеина ферментом M2-TmBglA, по сравнению с М1-TmBglA, свидетельствовала в пользу того, что остатки L400, А407 и Е408 в TmBglA в большей степени необходимы для проявления каталитической активности и связывания соевого изофлавонового гликозида, чем V170,A171, V173, G174, Н180.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2013
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2013.-N 5.-С.457-466. Библ. 25 назв.
Просмотров: 32