ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕАКЦИИ ТРАНСГЛИКОЗИЛИРОВАНИЯ, КАТАЛИЗИРУЕМОЙ АЛЬФА-ГАЛАКТОЗИДАЗОЙ ИЗ Thermotoga maritima, МЕТОДАМИ БЕЛКОВОЙ ИНЖЕНЕРИИ

Аннотация:

При высоких концентрациях субстрата гидролиз пара-нитрофенил aльфа-D-галактопирaнозида (pNPGal) a-D-галактозидазой из Thermotoga maritima (ТтГалА) сопровождается трансгликозилированием с образованием смеси (aльфа1,2)-, (aльфа1,3)- и (альфа1,6)-пара-нитрофенил (рNP) дигалактозидов. Молекулярное моделирование стадии реакции, предшествующей синтезу рNP дигалактозидов в активном центре фермента, привело к обнаружению аминокислотных остатков, модификация которых потенциально может увеличить эффективность реакции трансгликозилирования. После сайт-направленного мутагенеза предсказанного набора замен аминокислотных остатков гены фермента дикого типа и мутантных форм ТmГалА были экспрессированы в клетках Е. coli, а соответствующие ферменты выделены и проверены в синтезе различных pNР дигалактозидов. Было показано, что у трех мутантов, F328A, P402D и G385L, заметно увеличилась общая трансгликозилирующая активность по сравнению с ферментом дикого типа. Кроме того, мутант F328A оказался способным к образованию региоизомера со связью (aльфа1,2)- с выходом в 16 раз большим по сравнению с ТтГалА дикого типа.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2013
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2013.-N 10.-С.1422-1435. Библ. 34 назв.
Просмотров: 37