ХАРАКТЕРИСТИКА СТРУКТУРЫ И СВОЙСТВ УГЛЕВОД-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКОВОГО МОДУЛЯ СЕМЕЙСТВА 6(CtCBM6A)АЛЬФА-L-АРАБИНОФУРАНОЗИДАЗЫ ИЗ Clostridium thermocellum

Аннотация:

Ген, кодирующий углевод-связывающий белковый модуль типа А семейства 6 (CtCBM6A) из Clostridium thermocellum, был клонирован в вектор экспрессии рЕТ-21а(+); белок был экспрессирован в клетках Escherichia соИ BL-21(DE3) и очищен с помощью металлаффинной хроматографии. Молекулярная масса рекомбинантного С/СВМ6, определенная методом Ds-Na-ПААГ-электрофореза, составила 15 кДа. Изучение взаимодействия С/СВМ6А с растворимыми лигаидами, такими как арабиноксилан ржи и ксилан овса спельта, методом аффинного гель-электрофореза показало, что равновесные константы связывания (К равны 40 и 26 л/г соответственно, а при определении методом флуоресцентной спектроскопии — 33 и 15 л/г. В то же время, связывание нерастворимого лиганда (арабиноксилан пшеницы) происходило с существенно более высоким сродством: Ка = 230 М, а емкость связывания (N составляла 11 мкмоль белка на 1 г полисахарида. Кривая плавления белка С/СВМ6А в отсутствие ионов кальция содержала максимум при 52°, который смещался к 58° в присутствии Са, что свидетельствовало о важности этих ионов для поддержания структуры белка при повыщенной температуре. Гомологическое моделирование показало, что С/СВМ6А содержал характерное ядро, представляющее собой трехслойную бета-сендвич-структуру. Анализ полученной модели с помощью графика Рамачандрана свидетельствовал о том, что 89% аминокислотных остатков молекулы С/СВМ6А попадали в наиболее благоприятную область значений, 10% находились в дополнительной благоприятной области графика и 1 % — в области высокого допущения, что свидетельствовало о конформационной стабильности модуля СгСВМбА.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2013
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2013.-N 11.-С.1617-1626. Библ. 36 назв.
Просмотров: 42