ИССЛЕДОВАНИЕ КИНЕТИКИ ОБРАЗОВАНИЯ АМИЛОИДНЫХ ФИБРИЛЛ НА ОСНОВЕ ИНСУЛИНА

Аннотация:

Исследование структуры упорядоченных белковых агрегатов — амилоидных фибрилл, влияния нативной структуры белка и внешних условий на процесс фибриллообразования в настоящее время является предметом интенсивных исследований. Настоящая работа посвящена изучению кинетики образования амилоидных фибрилл на основе инсулина при низких значениях рН (при которых производятся многие этапы выделения и очистки этого белка) с использованием флуоресцентного зонда тиофлавина Т (ThT). Показано, что рост интенсивности флуоресценции ThT при формировании амилоидных фибрилл описывается сигмоидальной кривой, на которой можно выделить 3 участка — лаг-фазу, рост и выход на плато, характеризующие различные этапы образования фибрилл. Несмотря на обнаруженный разброс в протяженности лаг-фазы при одних и тех же условиях эксперимента (значениях рН и температуры), показано ее сокращение при перемешивании раствора и введении затравки. Данные, полученные с использованием электронной микроскопии, свидетельствуют о том, что образующиеся фибриллы представляют собой длинные неразветвленные нити диаметром -20 нм. При увеличении времени инкубации диаметр фибрилл не изменяется, в то время как длина их возрастает до 2—3 мкм, что сопровождается значительным ростом количества агрегатов фибрилл. Все полученные экспериментальные данные свидетельствует о том, что вне зависимости от кинетики образования свойства амилоидных фибрилл после завершения процесса фибриллообразования одинаковы. Результаты настоящей работы в сочетании с выполненными ранее исследованиями амилоидных фибрилл на основе инсулина могут быть существенны для формирования представлений о механизме их образования, а также для терапии амилоидозов, связанных с агрегацией инсулина.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2013
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2013.-N 11.-С.809-814. Библ. 28 назв.
Просмотров: 72