Получение и оценка клинической эффективности рекомбинантного антигена Т.pallidum Тр0453 для диагностики сифилиса

Аннотация:

Цель. Получение нового рекомбинантного антигена Т. pallidum Тр0453 и изучение эффективности его клинического использования при диагностике сифилиса. Для получения целевого рекомбинантного антигена Т. pallidum фрагмент ДНК возбудителя сифилиса, кодирующий белок Тр0453, был клонирован в вектор рЕТ28а. Для наработки полученной генетической конструкции вектор вводили в штамм Е. coli Тор10, отбирая канамицин-устойчивые колонии. Специфичность клонирования подтверждена методом секвенирования по Сенгеру. Гетерологическую экспрессию рекомбинантного антигена Т. pallidum проводили в штамме Е. coli BL21 (DE3). Очистка рекомбинантного варианта белка Т. pallidum Тр0453, содержащего дополнительную последовательность из 6 остатков гистидина на N-концевом участке молекулы, осуществлялась методом металл-хелатной хроматографии. Полученный гомогенный рекомбинантный белок Т. pallidum Тр0453 был использован в качестве антигена для выявления специфических IgG к исследуемому белку в сыворотке больных сифилисом с использованием иммунологического биочипа. В результате применение полученного рекомбинантного белка позволило выявить антитела к Т. pallidum в сыворотке крови больных сифилисом (первичным, вторичным, скрытым ранним и поздним). При исследовании сыворотки крови, полученной от здоровых доноров, антитела не обнаруживались. На основании приведенных данных можно сделать вывод о возможности использования полученного рекомбинантного белка в качестве дополнительного антигена для диагностики сифилиса. Включение нового антигена в тест-системы для диагностики сифилиса (в формате иммуноферментного анализа, иммуноблоттинга или иммуночипа) расширяет возможности серологической диагностики данного заболевания за счет увеличения спектра определяемых антител к Т. pallidum.

Авторы:

Издание: Вестник дерматологии и венерологии
Год издания: 2013
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2013.-N 6.-С.73-79. Библ. 12 назв.
Просмотров: 24