МЕТОДИКА ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕРОТИПОВ STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE

Аннотация:

Разработка и применение методики ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РРВ) для определения серотипов Streptococcus pneumoniae. Для выбора серотип-специфических олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно меченных зондов в качестве мишеней ПЦР выбраны гены wzx, wzy, wzz, wcwV и galU cps-локуса генома S. pneumoniae. С целью испытания возможности практического применения ПЦР-РВВ было исследовано 89 образцов спинномозговой жидкости (СМЖ), забранных в 2007 — 2010 гг. у больных с диагнозом пневмококковый менингит, поступивших в Клиническую-инфекционную больницу № 2 Москвы. Выбраны праймеры и зонды для определения 16 вакцинных и/или часто встречающихся серотипов, распределенные по четырем реакционным смесям, включаюшим также пару праймеров и зонд для детекции гена cpsA, присутствующего у всех капсульных пневмококков (внутренний контроль). Методика испытана на коллекции 108 штаммов пневмококков, собранных в НИИ антимикробной терапии и серотипированных ранее методом специфической П ЦР с электрофоретической детекцией и серологически с применением набора «Pneumotest-Latex». Специфичность и чувствительность ПЦР-РРВ равнялась 100%. Методика ПЦР-РРВ позволила определить серотип пневмококка в 79% клинических образцов СМЖ, содержащих ДНК S. pneumoniae. Наиболее часто выявляли серотипы 3 и 23F (по 13%), Применение ПЦР-РРВ не предполагает этап высева возбудителя, значительно сокращает время проведения анализа и повышает чувствительность исследования. Разработанная методика позволит приступить к решению важной задачи — выяснению спектра и частоты встречаемости серотипов пневмококков, циркулирующих на территории России.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2014
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2014.-N 1.-С.41-48. Библ. 10 назв.
Просмотров: 115