ТРИГГЕР ФАКТОР ОСУЩЕСТВЛЯЕТ РЕФОЛДИНГ ГЕТЕРОДИМЕРНЫХ, НО НЕ МОНОМЕРНЫХ ЛЮЦИФЕРАЗ

Аннотация:

Проведено измерение уровня рефолдинга термоинактивированных люцифераз, осуществляемого триггер фактором (ТФ) или шапероном DnaKJE. В качестве субстратов использовали гетеродимерные (сф) бактериальные люциферазы Aliivibrio fischeri, Photobacterium leiognathi и Vibrio harveyi, а также мономерные люциферазы — светлячковую (Luciola mingrelica) и бактериальную (Vibrio harveyi). Показано, что в присутствии ТФ как in vitro (с очищенным ТФ), так и in vivo (в клетках Escherichia coli, содержащих плазмиду с геном tig) восстановление ферментативной активности (рефолдинг) наблюдается только у гетеродимерных, но не мономерных люцифераз. В отличие от ТФ шаперон DnaKJE осуществляет рефолдинг как мономерных, так и гетеродимерных люцифераз с равной эффективностью. В бактериальной клетке в процессе фолдинга белков участвуют АТР-независимый шаперон триггер фактор (ТФ) и АТР-зависимые шапероны GroEL/ES и DnaKJE. Относительно ТФ предполагалось, что его основная функция — фолдинг вновь синтезируемой полипептидной цепи — тесно связана с работой рибосомы, с 50Б-субъединицей которой ТФ формирует прочный комплекс. ТФ в Escherichia coli экспрессируется конститутивно в количестве, превышающем в 2—3 раза содержание рибосом (50 и 20 мкМ для ТФ и рибосом соответственно). Согласно основной схеме ТФ, локализованный в рибосоме на месте высвобождения полипептидной цепи в цитоплазму, участвует в фолдинге белка, завершение же процесса сборки белка осуществляют в цитоплазме шапероны DnaKJE и GroEL/ES. Однако в работе Мартинез-Хэкерт и Хендриксона было показано, что ТФ соочищается и стабильно ассоциирован с большим количеством цитоплазматических полноразмерных полипептидных цепей.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2014
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2014.-N 1.-С.79-86. Библ. 31 назв.
Просмотров: 75