ИНДУЦИРУЕМЫЕ СПЕЦИФИЧЕСКИЕ LUX-БИОСЕНСОРЫ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ АНТИБИОТИКОВ: КОНСТРУИРОВАНИЕ И ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Аннотация:

На основе бактерий Escherichia coli сконструированы высокочувствительные специфические luxбиосенсоры для детекции антибиотиков тетрациклинового и бета-лактамного рядов, квинолонов, а также аминогликозидов. Для создания биосенсоров использовали бактерии, содержащие гибридные плазмиды, в которых транскрипция генов-репортеров luxCDABE Photorhabdus luminescens осуществлялась с индуцируемых промоторов генов tetA, атрС, cda, ibpA соответственно. Определены основные характеристики (пороговая чувствительность, амплитуда и время ответа) lux-биосенсоров. Показана высокая специфичность биосенсоров, реагирующих исключительно на антибиотики определенного вида. Для обнаружения антибиотиков в пищевых продуктах в настоящее время, помимо традиционных микробиологических тестов, иммунохимических и хроматографических методов, используются биолюминесцентные методы. Биолюминесцентные методы можно разделить на две группы. Первая группа методов основана на токсическом действии антибиотика на бактериальную клетку, что оценивается по снижению интенсивности биолюминесценции клеточной суспензии. В данном варианте в качестве биосенсора используются или природные штаммы светящихся морских бактерий, или бактерии Escherichia coli, содержащие гибридную плазмиду, в которой гены luxAB, кодирующие люциферазу, расположены под конститутивным промотором. Исходно клетки биосенсора ярко люминесцируют. При наличии в среде антибиотиков интенсивность биолюминесценции клеток со временем снижается. Эта группа методик является вариантом "Микротокс-теста", широко используемого для детекции в окружающей среде различных токсических агентов. К недостаткам данных методик необходимо отнести неспецифичность анализа, так как помимо антибиотиков токсические вещества различной природы также вызывают снижение интенсивности биолюминесценции. Отметим, что при использовании комбинированного биолюминесцентного метода с дополнительной обработкой клеток биосенсора Escherichia coli TG-1, содержащего плазмиду с lux-опероном Photobacterium leiognathi (биосенсор "Эколюм"), сывороткой крови, содержащей антитела к данной группе антибиотиков, авторам работ удалось значительно повысить как чувствительность, так и специфичность метода.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2014
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2014.-N 1.-С.112-117. Библ. 24 назв.
Просмотров: 147