ВЕРИФИКАЦИЯ МЕТОДИКИ ВЫЯВЛЕНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК ПАРВОВИРУСА В19 МЕТОДОМ ПЦР В ПЛАЗМЕ ДЛЯ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ

Аннотация:

С начала 2000-х годов в качестве профилактической меры, обеспечивающей повышение безопасности сырья для производства препаратов крови, на отраслевом международном уровне введено добровольное тестирование плазмы для фракционирования на наличие ДНК парвовируса В19 (B19V) . Возбудитель парвовирусной инфекции представляет собой безоболочечный ДНК-содержащий вирус. В настоящее время выделяют три генотипа вируса: Генотип 1 (штамм В19), Генотип 2 (штамм А6) и Генотип 3 (штамм V9/D91.1).Для B19Vхарактерны воздушно-капельный, вертикальный и гемо-трансмиссивный пути передачи инфекции. В тран-сфузиологической практике наиболее значимым фактором передачи являются препараты крови на основе человеческой плазмы, в особенности препараты плазменных факторов свертывания крови . Основной целью исследования плазмы для фракционирования на наличие ДНК B19V является ограничение вирусной нагрузки производственного пула не выше определенного уровня. Так на территории Евросоюза с 2004 года законодательно установлено, что в отношении сырья для производства вирус — инактивированной пулирован-ной человеческой плазмы содержание ДНК B19V не должно превышать 104 МЕ/мл .Аналогичное требование имеется и в США . Введение в лабораторную практику исследования плазмы для фракционирования на наличие ДНК В19V привело к формированию основных требований к диагностическим тест-системам: должны выявлять все три генотипа возбудителя с определением вирусной нагрузки [5], а также позволять проводить исследования с большой размерностью пула, как правило, от 96 до 512 образцов. Поэтому вопрос выбора теста для выявления ДНК B19V, а также последующая верификация методики согласно нормативным требованиям являются важными при разработке алгоритмов исследования сырья при производстве препаратов крови. В связи с созданием современного отечественного производства препаратов крови , эти вопросы на сегодняшний момент являются актуальными и в Российской Федерации. К сожалению, выпускаемые в настоящее время отечественные тест-системы не удовлетворяют выше обозначенным требованиям. Так, РеалБест ДНК Parvovirus В19 (Вектор Бест, РФ) и тест-си-стема производства ЗАО «НПФ ДНК-Технология» предназначены для выявления B19V, причем последняя должна использоваться только для научных исследований. Набор реагентов «Амплисенс Parvovirus B19-FL» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, РФ) позволяет проводить выявление и количественное определение вируса, но обладает недостаточными аналитическими характеристиками. Аналитическая чувствительность составляет всего 360 МЕ/мл ДНК B19V, что не дает формировать пулы размером более 10 образцов . Кроме того, в инструкции по применению производителем не представлены сведения о возможности использования в качестве исследуемого материала аферезной плазмы или плазмы для фракционирования, а также способности набора реагентов выявлять все три генотипа B19V. В настоящее время на отечественном рынке имеется одна зарегистрированная в установленном порядке коммерческая тест-система для выявления и количественного определения всех трех генотипов B19V и позволяющая проводить исследование образцов плазмы для фракционирования в пулах, размером 96 образцов. Это тест-система cobas TaqScreen DPX Test (далее по тексту — тест DPX) (Roche Molecular Systems, США). Целью настоящего исследования являлась оценка следующих характеристик методики выявления и количественного определения ДНК B19V в плазме для фракционирования с помощью теста

Авторы:

Издание: Вестник службы крови России
Год издания: 2014
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2014.-N 1.-С.48-53. Библ. 14 назв.
Просмотров: 198