МЕТОДИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ОЦЕНКИ АКТИВАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ IN VITRO

Аннотация:

В работе представлены результаты оценки активации мононуклеаров периферической крови (МПК') тремя современными методами, определенными в одних и тех же пробах клеточных культур у здоровых доноров на 1, 3, 7-е сутки инкубации in vitro. Изучали экспрессию мембранных маркеров клеточной активации методом проточной цитофлюорометрии, концентрацию цитокинов в культуральной среде методом мультиплексного анализа, пролиферацию стимулированных клеток с помощью красителя CyQuant с последующим определением количества ДНК. Прирценке экспрессии поверхностных маркеров CD69, CD71, CD95 (Fas/Apo-1), CD154 (CD40L), CD25, HLA-DR на Т-лимфоцитах/хелперах с (фенотипом CD3*CD4*CD45* в ответ на стимуляцию ФГА выявили, что для всех без исключения маркеров экспрессия значимо повышалась по сравнению с таковой в контроле, но время достижения максимального уровня экспрессии оказалось разным для каждого из них. При исследовании продукции цитокинов мы зарегистрировали синтез всех показателей через 24 ч, в том числе в условиях спонтанного культивирования. Индекс стимуляции после 3 сут инкубации возрастал у большинства цитокинов (интерлейкин (IL)-2, IL-4, IL-6, интерферон-гамма(IFNy), фактор некроза опухоли а, гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF) более чем в 2-4 раза. При увеличении срока инкубации отметили, что индекс стимуляции к 7-м суткам снижался для большинства цитокинов, но оставался высоким для IL-6, GM-CSF и IFNy. Пролиферативная активность МПК через 1 сут возрастала более чем в 2 раза (ИС = 2,5). Наибольшую активность наблюдали через 3 сут (ИС = 5,89). Через 7 сут инкубации она снижалась (ИС = 1,7). Представленные методы могут быть полезны для оценки ответа лимфоцитов на воздействие различными агентами in vitro.

Авторы:

Издание: Иммунология
Год издания: 2014
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2014.-N 2.-С.85-88. Библ. 8 назв.
Просмотров: 61