ВЫСОКОАКТИВНЫЕ ФРАКЦИИ РЕКОМБИНАНТНОГО ДЕСТАБИЛАЗЫ-ЛИЗОЦИМА МЕДИЦИНСКОЙ ПИЯВКИ

Аннотация:

В результате фракционирования высокоочищенного низкоактивного рекомбинантного белка дестабилазы-лизоцима (Дест-Лиз) на катионообменной колонке TSK CM 3-SW удалось отделить неактивную фр.IV, содержащую 90% белка, от трёх фракций (I, II и III), представляющих белки, лизоцимная и изопептидазная активности которых коррелируют с активностями нативного фермента. Однако, соотношение лизоцимной и изопептидазной активностей во фракциях I — III таково, что максимальная лизоцимная активность сосредоточена во фракции III, а изопептидазная - во фракции I. Обсуждается возможность регуляции разных функций Дест-Лиз в связи с образованием его комплексных форм. Фермент Дест-Лиз (КФ 3.5.1.44), компонент секрета слюнных клеток медицинской пиявки, сначала был обнаружен и выделен как эндо-эпсилон-(у-Gly)-Lуs-изопептидаза, расщепляющая эти связи в стабилизированном фибрине - основе кровяного тромба и в продукте его протеолиза - D-димере. Позднее у этого фермента были выявлены лизоцимная и прямая антимикробная функции. В результате экспрессии одного из трёх генов Дест-Лиз был получен и очищен его рекомбинантный вариант, которому свойственны все функции природной формы. Однако активности полученного высокоочищенного препарата рекомбинантного фермента в лизоцимном и изопептидазном тестах составляли 1-5% относительно природного, выделенного из медицинской пиявки, что свидетельствует о низкой эффективности стадии рефолдинга. Последнее может быть обусловлено тем, что при формировании структуры Дест-Лиз образуется семь внутримолекулярных дисульфидных связей, а используемая система экспрессии гена не включает S-S-изомеразы. По-видимому рекомбинантный препарат фермента содержит не только активные, правильно "свёрнутые", но и неупорядоченные его формы, образованные, например, за счет как эндо-, так и экзомолекулярных дисульфидных связей

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2014
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2014.-N 3.-С.332-337. Библ. 10 назв.
Просмотров: 98