ИНГИБИРУЮЩЕЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ Ds-Na В ПОСТМИЦЕЛЛЯРНОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ НА ТЕРМИЧЕСКУЮ АГРЕГАЦИЮ И АКТИВНОСТЬ ПАПАИНА

Аннотация:

Цистеиновая протеаза (папаин из млечного сока Carica papaya) подвержена необратимой термической денатурации. Установлено, что развертывание (анфолдинг) папаина при повышенной температуре происходит одновременно с процессом его самоагрегации, протекающем при температуре свыше 50°. Степень агрегации белка увеличивалась при повышении его концентрации от 3 до 40 мкМ. Агрегация папаина изучена турбодиметрическим методом, подтверждена наблюдением за интенсивностью светорассеивания и интенсивностью флуоресценции 1-анилино-8-нафталинсульфонат (АНС), а также методом трансмиссионной электронной микроскопии. Термическая агрегация папаина значительно снижалась в присутствии додецилсульфата натрия (Ds-Na) в постмицеллярной концентрации. Методом кругового дихроизма (КД) в области «дальнего» УФ установлено, что Ds-Na способствовал значительному увеличению количества а-спиральных структур в молекуле папаина, предотвращал анфолдинг белка и, тем самым, ингибировал процесс его агрегации. Максимальную активность папаин проявлял при нейтральном рН и при 65°, однако в присутствии 6 мМ Ds-Na (выше критической концентрации мицеллообразования, ККМ) активность фермента снижалась в ~10 раз. Таким образом, использование Ds-Na для повышения степени спирализации белка не решало всех проблем, связанных с агрегацией таких важных для промышленности белков как папаин, поскольку требовалось не только предотвратить его агрегацию, но и сохранить в функционально активном состоянии в присутствии ингибиторов агрегации.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2014
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2014.-N 8.-С.985-998. Библ. 33 назв.
Просмотров: 31