АНАЛИЗ СУБПОПУЛЯЦИЙ ВЕЗИКУЛ, НЕСУЩИХ АУТОАНТИГЕН РАННИХ ЭНДОСОМ ЕЕА1

Аннотация:

Конфокальный иммунофлуоресцентный анализ интерфазных клеток HeLa показал, что аутоантиген ранних эндосом ЕЕА1, участвующий в регуляции гомотипических слияний, ассоциирован с везикулами, которые можно разделить на две субпопуляции по их размерам, локализации и уровню связывания с ЕЕА1. Клетки в течение 12 ч до исследования вели на среде, лишенной сыворотки, для минимизации лигандстимулируемого эндоцитоза ростовых сывороточных факторов. Первая субпопуляция представлена в основном крупными везикулами, сильно декорированными ЕЕА1. Эти везикулы локализованы преимущественно в околоядерной области. Эксперименты по разборке микротрубочек показывают, что такая локализация обеспечивается тубулиновым цитоскелетом. Вторая субпопуляция представлена многочисленными мелкими везикулами, которые слабо метятся антителами на ЕЕА1 и распределены в основном по периферии цитоплазмы. Двойной непрямой иммунофлуоресцентный анализ фиксированных клеток показал, что околоядерные везикулы, обогащенные ЕЕА1, полностью колокализуются с ключевым белком ранних эндосом — малой ГТФазой Rab5, тогда как около половины слабо декорированных ЕЕА1 периферических везикул негативны по Rab5. Обнаружено, что число RabS-позитивных везикул в расчете на клетку больше, чем везикул, несущих ЕЕА1. Таким образом, в лишенных сыворотки клетках HeLa с низким уровнем эндоцитоза выявляются субпопуляция везикул, обогащенных ЕЕА1 и Rab5 (обозначаемых как EEA1+++/Rab5+), и субпопуляция слабо окрашенных ЕЕА1-везикул, которые могут быть как RabS-положительными, так и отрицательными (EEA1+/Rab5+ и EEA1+/Rab5-). Кроме того, в клетках присутствует фракция везикул, ассоциированных только с Rab5 (EEA1-/Rab5+). Полученные данные могут свидетельствовать о различной функциональной роли всех этих субпопуляций, несущих белки, традиционно рассматриваемые как эквивалентные друг другу маркеры ранних эндосом.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2014
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2014.-N 10.-С.741-747. Библ. 13 назв.
Просмотров: 40