УВЕЛИЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ EcoDam ДНК-(АДЕНИН)-МЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ К ДНК-СУБСТРАТУ ПУТЕМ САЙТСПЕЦИФИЧЕСКОГО МУТАГЕНЕЗА

Аннотация:

Ферменты ДНК-метилтрансферазы (МТазы), осуществляющие метилирование ДНК, широко распространены в клетках прокариот. С целью поиска форм фермента EcoDam с высокой специфичностью к гемиметилированной ДНК мы заменили остатки L122, Р134 и VI33 в молекуле белка на другие аминокислоты путем сайтспецифического мутагенеза и изучили каталитическую активность всех полученных мутантных форм фермента с использованием в качестве субстратов неметилированного и гемиметилированного олигонуклеотидного ДНК-субстрата. Мы установили, что замены L122->A, L122->S и L122->A/V133->L приводят к появлению мутантных форм EcoDam, способных распознавать присутствие СН3-группы в положении N6 аденинового основания в области двухспирального участка узнавания (5'-GATC-3'/3'-CTAG-5') и метилировать только гемиметилированный ДНК-субстрат.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2014
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2014.-N 11.-С.1548-1553. Библ. 12 назв.
Просмотров: 27