Усиление иммунного ответа при сочетанном введении рекомбинантных днк и белков репликативного комплекса вируса гепатита С

Аннотация:

Перспективным подходом к созданию вакцин против гепатита С является разработка конструкций на базе нуклеотидных последовательностей вируса гепатита С (ВГС),однако оптимальный состав вакцинной композиции не определен. Цель работы состояла в оценке эффективности иммунного ответа при сочетанном введении мышам ДНК-конструкции pcNS3-NS5B. кодирующей белки репликативного комплекса, и рекомбинантных неструктурных белков NS3 и NS5B ВГ'С с использованием различных адыовантов. Мышей DBA иммунизировали ДНК-конструкцией и/или реком-бинантными белками троекратно. Гуморальный иммунный ответ оценивали в ИФА. клеточный - по анализу уровня пролиферации лимфоцитов в реакции блаеттранеформации in vitro, по синтезу и секреции цитокинов IFN-y и IL-2 методами CLISpot и ИФА. Показано, что плазмида pcNS3-S!S5B вызывает преимущественно Т-клеточный ответ, тогда как NS3 и NS5B стимулируют сильный гуморальный иммунный огвет. Впервые установлено принципиальное преимущество комбинированной вакцинации животных ДНК-конструкциейpcNS3-NS5B в сочетании с белками NS3 и NS5B ВГС: статистически значимо усиливается как гуморальный, гак и клеточный иммунный огвет. При этом стимулируется иммунный ответ не только к введенным белкам NS3 и NS5B. но также и к другим антигенам, кодируемым плазмидой pcNS3-NS5B (NS4, NS5A). Наиболее интенсивный иммунный ответ получен при троекратном совместном введении ДНК-конструкции pc.MS3-NS5B с генным адъювантом pcGM-CSF в сочетании с рекомбинантными белками NS3 и NS5B ВГС. введенными с IFN-a. Адыовантная активность рекомбинантного белка IFN-alpha, впервые показанная на модели генов и белков ВГС. может служить предпосылкой для включения его в кандидатный вакцинный препарат. К л ю ч е в ы е слова: вирус гепатита С; неструктурные белки: ДНК-иммунизация; рекамбинантные белки; иммунный ответ; адъюванты, IFN-a; вакцина. Гепатит С признан одной из главных причин хронических заболеваний печени, включая терминальные стадиицирроз и гепатокарциному. До 80% случаев острого гепатита С переходят в хроническую форму, что объясняется повышенной частотой мутаций вируса гепатита С (ВГС), интерференцией вирусньг* белков с факторами врожденного и адаптивного иммунитета xV-зяииа. образованием «эскейп»-вариантов ВГС, ускользающих от иммунного ответа . Исследование больных с разрешившимся гепатитом С и с хронизацией инфекции показало, что основным благоприятным фактором является ранний, сильный и муль-тиспецифичный клеточный ответ к белкам ВГС.. Стандартная терапия гепатита С в настоящее время основана на сочетании пегилированного рекомбинантного IFN-альфа и рибавирина; при этом устойчивое исчезновение вируса наблюдается не более чем у 50% пациентов .Терапия с применением новых препаратов прямого противовирусного действия на основе ингибиторов ферментов ВГС - NS3 и NS5B. а также блокаторов белка NS5A позволяет излечивать большинство пациентов, но ее крайне высокая стоимость делает лечение недоступным большинству больных. Большие надежды возлагают на создание вакцинного препарата, способного оказывать как профилактическое действие (предотвращение заражения и/или облег чение течения заболевания), так и терапевтический эффект (усиление иммунного ответа и элиминация вируса у пациентов с хроническим гепатитом С). Основой для разработки вакцин служат генно-инженерные продукты, имитирующие последовательности ВГС: рекомбинантные белки, пептиды, представляющие В- и Т-клеточные эпигоны, ДНК в составе плазмид и вирусных векторов . Кандидатные вакцины против гепатита С находятся в стадии разработки, некоторые из них проходят клинические испытания, однако значительных успехов пока добиться пе удалось. Ранее было установлено, что созданная нами ДНК-конструкция pcNS3-NS5B, кодирующая неструетурные белки репликативного комплекса - NS3, NS4A, NS4B. NS5A и NS5B в одной открытой рамке считывания, превосходит по иммуногенности плазм иды, несущие гены отдельных неструктурных белков . В тоже время значительное усиление Т-клеточного ответа на ДНК-вакцину, содержащую гены репликативного комплекса ВГС. не сопровождалось столь же значительным повышением уровня антител. В последнее время показан вклад нейтрализующих антител, индуцируемых поверхностными белками ВГС. в защите от заражения вирусом.Однако роль антител к неструктурным белкам ВГС недостаточно изучена. Известно, что индукция гуморального иммунного ответа достигается введением в организм чужеродных (в том числе вирусных) белков. Рекомбинантные белки, экснрессированные в бактериальных клетках и несущие аминокислотные последовательности ВГС, выполняют роль суррогатных антигенов, однако их иммуностимулирующая активность, как правило, ниже, чем натуральных вирусных белков. В связи с этим представляло интерес выяснить, приведет ли введение рекомбинантных белков ВГС наряду с ДНК-вакциной к гармонизации иммунного ответа т.е. к установлению баланса между гуморальным (Тh2-зависимым) и клеточным (Независимым) звеньями иммунитета Одной из задач работы было выяснить, удастся ли достигнуть дополнительного усиления ответа на ДНК-белковую вакцину с помощью иммуномодуляторов. В качестве рекомбинантных белков выбраны последовательности хеликазы NS3 ВГС и РНК-зависимой РНК полимеразы NS5B, которые участвуют в репликации ВГ С и проявляют иммуногенную активность in vivo . Цель работы состояла в экспериментальной оценке эффективности иммунного ответа при сочетанном введении мышам ДНК-конструкции pcNS3-NS5B и рекомбинантных белков NS3 и NS5B ВГС и в изучении иммуностимулирующей активности различных адьювантов.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2015
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2015.-N 1.-С.36-41. Библ. 20 назв.
Просмотров: 68