Дальневосточный государственный медицинский университет Поиск | Личный кабинет | Авторизация
Поиск статьи по названию
Поиск книги по названию
Каталог рубрик
в коллекциюДобавить в коллекцию

Разработка и валидация методики определения верапамила гидрохлорида в фармацевтической композиции методом ВЭЖХ

Текст статьи доступен по ссылке: http://www.fesmu.ru/dmj/20143/2014318.aspx

Полный текст
А.В. Бабьяк1, Е.В. Компанцева2
Разработка и валидация методики определения верапамила гидрохлорида в фармацевтической композиции методом ВЭЖХ
1Дальневосточный государственный медицинский университет, 680000, ул. Муравьева-Амурского 35, тел. 8-(4212)-32-63-93, e-mail: nauka@mail.fesmu.ru, г. Хабаровск;
2Пятигорский медико-фармацевтический институт, 357532, пр. Калинина, 11, тел. 8-(793)-32-33-37, e-mail: canpgfa84@mail.ru, г. Пятигорск
Контактная информация: А.В. Бабьяк, e-mail: annav.babyak@gmail.com
Резюме:
В настоящей статье описана методика определения верапамила гидрохлорида в фармацевтической композиции гипотензивного действия, куда он входит в составе таблеток продленного действия. Цель представленной работы заключается в разработке и валидационной оценке аналитической методики количественного определения верапамила в лекарственной форме методом ВЭЖХ. В ходе работы обоснован экстрагент для извлечения исследуемого вещества из таблеточной массы, разработаны условия ВЭЖХ определения. Валидация методики была проведена по параметрам: специфичность, линейность, правильность и повторяемость. Установлено, что по всем представленным параметрам методика отвечает требованиям нормативных документов.
Ключевые слова:
верапамила гидрохлорид, ВЭЖХ, валидация


А.V. Babyak1, Е.V. Kompanceva2
Development and validation of verapamil hydrochloride determination in a pharmaceutical composition by HPLC
1Far Eastern State Medical University, Khabarovsk;
2Pyatigorsky branch of the State Budgetary Educational Establishment of Higher Professional Education "Volgograd State Medical University" of the Ministry of Public Health Services of the Russian Federation, Pyatigorsk
Summary:
This article describes the method of determination of verapamil hydrochloride in a pharmaceutical composition with a hypotensive action, where it is included as a part of prolonged action tablets. The purpose of the presented work is development and validation of analytical technique of quantitative determination of verapamil in pharmaceutical composition by HPLC-method. During the experiment, the extractant is selected for extraction of an analyte from the tablet mass, HPLC determination conditions were determined. Validation methodology was carried out based on the parameters: specificity, linearity, accuracy and precision. The authors revealed that all the parameters of the presented technique meet the requirements of normative documents.
Key words:
verapamil hydrochloride, HPLC, validation
Введение


Верапамила гидрохлорид является представителем группы антагонистов кальция. Помимо гипотензивного эффекта, он обладает выраженным антиаритмическим и антиатерогенным действием, метаболической нейтральностью, что делает его одним из препаратов выбора для комбинированной лекарственной терапии [1].

В ходе ранее проведенных исследований нами была разработана фармацевтическая композиция, в состав одной капсулы которой верапамила гидрохлорид входит в виде 4 таблеток продленного действия и лизиноприл в виде гранул [2].

Цель настоящей работы заключается в разработке и валидации ВЭЖХ методики для количественного определения верапамила гидрохлорида в фармацевтической композиции гипотензивного действия.

В статье представлены результаты валидации разработанной методики по параметрам: специфичность, линейность, правильность и повторяемость.

Материалы и методы


В работе использовались приборы: жидкостный хроматограф Agilent 1260 Infinity с колонкой Luna 5u длиной 25 мм с сорбентом Силасорб С18; рН-метр ионометр 410; аналитические весы марки Т-А-13.

Верапамила гидрохлорида в одной капсуле содержится в дозе 100 мг в виде 4 таблеток по 25 мг. В связи с этим, состав таблеток продленного действия (в пересчете на 1 таблетку):

Верапамила гидрохлорид - 25 мг;

Натрия альгината - 50 мг;

Микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ) - 15 мг;

Магния стеарат - 0,6 мг;

Plasdone K-90 - 7,5 мг.

Определение валидационных параметров методики проводили на модельных смесях таблеток верапамила гидрохлорида в пересчете на одну дозу вещества (100 мг).

Растворы модельных смесей таблеток верапамила гидрохлорида и стандартного образца (СО) верапамила гидрохлорида для измерения площади пиков готовили в концентрации 0,1 мг/мл.

Методика. Около 0,4 г (точная навеска) порошка модельной смеси растертых таблеток верапамила гидрохлорида помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, встряхивали с 3 мл метанола в течение 10 мин., раствор доводили до метки этим же растворителем. Осадок отфильтровывали с помощью фильтра типа "синяя лента". 1 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в воде и доводили этим же растворителем до метки. Раствор фильтровали через фильтр типа "синяя лента", измеряли площади пиков.

В качестве подвижной фазы (ПФ) была выбрана система растворителей: фосфатный буферный раствор (рН=3,0) - ацетонитрил - изопропанол в соотношении 30:35:35, режим элюирования изократический. Скорость потока ПФ 0,8 мл/мин., объем пробы 20 мкл, температура термостата колонки 40 °С. Детектирование осуществляли с помощью УФ-детектора при длине волны 278 нм. В колонку хроматографа попеременно вводили равные объемы раствора СО верапамила гидрохлорида и растворы испытуемых модельных таблеток, измеряли площади пиков.

Результаты и обсуждение


На первом этапе для проведения анализа необходимо было подобрать растворитель для извлечения верапамила гидрохлорида из таблеточной массы. Использование водных растворителей не представлялось возможным, т. к. входящий в состав таблеток натрия альгинат медленно растворяется в воде, образуя вязкий гель. Учитывая растворимость верапамила гидрохлорида и вспомогательных веществ, нами было предложено использовать метанол, который эффективнее, чем этанол извлекает действующее вещество и в котором нерастворим натрия альгинат.

В качестве подвижной фазы нами была выбрана система: фосфатный буферный раствор (от 10 до 90) - ацетонитрил (от 10 до 90), без включения аминов и их производных, изократический режим элюирования и детектирование при 278 нм [5, 6]. В предложенных условиях на хроматограммах модельных смесей таблеток верапамила гидрохлорида фактор асимметрии пика верапамила и разрешение между пиком исследуемого вещества и пиком вспомогательных веществ не соответствовали требованиям НД [3]. Оптимальные результаты мы получили при введении в ПФ в качестве третьего компонента раствора изопропилового спирта. Соотношение растворителей фосфатный буферный раствор (рН 3,0) - ацетонитрил - изопропанол при этом составило 30:35:35.

Валидацию разработанной методики проводили в соответствии с проектом ОФС 42-0113-09 "Валидация аналитических методик".

Специфичность разработанной методики определяли путем сравнения хроматограмм модельных таблеток верапамила и плацебо-смеси. Время удерживания (tR) исследуемого вещества на хроматограмме СО верапамила составляет 3,29 минуты. На хроматограммах модельных таблеток верапамила помимо пика основного вещества с tR=3,29 мин. зафиксирован пик с tR=2,20 мин. На хроматограмме плацебо-смеси обнаружен пик, время удерживания которого также составляет 2,20 мин, а пик исследуемого вещества отсутствует (рисунок).


Рис. Хроматограмма модельных таблеток верапамила гидрохлорида (2) и плацебо-смеси (1)

Согласно растворимости вспомогательных веществ, пик на хроматограмме смеси "плацебо" соответствует PlasdoneK-90. В соответствии с полученными результатами установлено, что присутствие вспомогательных веществ не мешает определению верапамила гидрохлорида в таблетках.

Линейность определяли путем измерения площади пиков извлечений из 5 образцов модельных смесей таблеток верапамила гидрохлорида с содержанием действующего вещества 80, 90, 100, 110 и 120 %. Установлено, что аналитическая область методики, находящаяся в диапазоне 0,8-1,2 мг/мл, входит в пределы линейной зависимости и описывается уравнением у=14 959х -269,6 с коэффициентом корреляции r=0,999.

Правильность предлагаемой методики определяли на 6 образцах модельных смесей таблеток с известным содержанием верапамила гидрохлорида.

С целью проверки повторяемости методики проводили трехуровневый эксперимент по 3 опыта на каждом уровне. Диапазон измерения был выбран исходя из варьирования содержания верапамила в одной дозе лекарственной формы (±20 %).

Общие результаты валидационной оценки ВЭЖХ определения верапамила гидрохлорида в модельных смесях таблеток представлены в таблице.

Таблица. Результаты валидационной оценки ВЭЖХ методики определения верапамила гидрохлорида Наименование показателя Оптимальное значение (НД) Результат определения Соответствие требованиям НД [3, 4]
Специфичность однородность пика пик определяемого вещества четко отделяется от пиков вспомогательных веществ +
Аналитическая область результаты должны иметь приемлемый уровень правильности и повторяемости методика применима в интервале от 80 до 120 % от номинального значения содержания вещества в модельных таблетках +
Линейность (коэффициент корреляции r) |r|≥ 0,99 0,999 +
Правильность (критерий Стьюдента) ≤2,57 0,82 +
Повторяемость (относительное стандартное отклонение RSD) ≤3 % 1,63 % +


Согласно представленным данным для разработанной методики выполняется условие линейной зависимости у=14 959х -269,6 (|r|≥0,990,99), правильности (tвыч.табл. (Р, f)), повторяемости (RSD≤3 %).

Выводы


В ходе экспериментальной работы предложена методика количественного определения верапамила гидрохлорида в фармацевтической композиции методом ВЭЖХ. При помощи валидационной оценки установлено, что разработанная методика ВЭЖХ валидна по показателям: специфичность, аналитическая область, линейность, правильность, повторяемость.

Литература


1. Диагностика и лечение артериальной гипертензии: Российские рекомендации (четвертый пересмотр) // Системные гипертензии. - 2010. - № 3. - С. 5-26.
2. Компанцева Е.В. Разработка состава и технологии таблеток верапамила с контролируемым высвобождением действующего вещества // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2013. - № 3. - С. 17-20.
3. Сапрыкин Л.В. Практика и методические основы ВЭЖХ. - М., 2006. - 151 с.
4. Эпштейн Н.А. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе (обзор) // Химико-фармацевтический журн. - 2004. - Т. 38, № 4. - С. 40-56.
5. HPLC method for determination of verapamil in human plasma after solid-phase extraction // Journal of Biochemical and Biophysical Methods. - 2008. - Vol. 70, № 6. - P. 1297-1303.
6. Ho P.C. Simultaneous HPLC analysis of S- and R-verapamil and metabolites, S- and R-norverapamil in human plasma // J. Liq. Chromatogr. and Relat. Technol. - 2000. - Vol. 23, № 11. - P. 1711-1723.

Аннотация:

В настоящей статье описана методика определения верапамила гидрохлорида в фармацевтической композиции гипотензивного действия, куда он входит в составе таблеток продленного действия. Цель представленной работы заключается в разработке и валидационной оценке аналитической методики количественного определения верапамила в лекарственной форме методом ВЭЖХ. В ходе работы обоснован экстрагент для извлечения исследуемого вещества из таблеточной массы, разработаны условия ВЭЖХ определения. Валидация методики была проведена по параметрам: специфичность, линейность, правильность и повторяемость. Установлено, что по всем представленным параметрам методика отвечает требованиям нормативных документов.

Авторы:

Бабьяк А.В.
Компанцева Е.В.

Издание: Дальневосточный медицинский журнал
Год издания: 2014
Объем: 3с.
Дополнительная информация: 2014.-N 3.-С.72-74. Библ. 6 назв.
Просмотров: 87

Рубрики
Ключевые слова
bioVISION
in
rel
альгинаты
амины
анализ
аналитические
аналитический
антагонисты
антиаритмическая
антиатерогенной
антигипотензивные
артериальная
асимметрия
ацетонитрилы
биологический
буферные
валидация
варьирующая
введен
верапамил
веса
вещество
включениями
вода
водное
волна
вопрос
восток
время
вспомогательные
входной
выбор
вывод
высвобождения
вэжх
вязкость
гель
гидрохлорид
гипертензии
гипотензивная
готовность
гранулы
групп
дальний
данные
действие
действия
детектирование
диагностика
диапазона
длина
документы
жидкостная
зависимости
значению
извлечение
измерение
изопропан
изопропиловый
интервал
ионометрия
использование
исследование
исследований
исход
кальций
капсула
качества
ключ
количественного
колонки
комбинированная
композиция
компонент
контролируемая
концентрация
корреляция
коэффициент
край
критерийФишера
лекарств
лекарства
лекарственна
лекарственные
лекарственный
лечение
лизиноприл
линейная
литература
магний
марки
массы
материал
медицинская
медленно
метаболическая
метанол
метка
метод
методика
методические
микрокристалл
минута
модели
настоящие
натрий
нейтральные
нормативная
обзор
областей
обнаружение
образ
образцов
общие
объем
одного
однородность
определение
оптимальное
осадок
основа
основной
отдел
отклонение
относительная
оценка
параметр
первая
пересмотра
пика
плацебо
площадь
повтор
подвижная
показатели
пола
помощи
порошки
поток
правильная
правильность
практика
представители
препараты
прибор
пригодность
прием
пробы
проведение
проведения
проверки
проект
производные
путем
работа
равными
разработка
разрешение
раствор
растворимость
растворители
режим
результата
рекомендации
рисунок
российские
связей
сила
систем
системная
скорость
скрининг
слова
смеси
содержание
создание
соответствие
соотношение
сорбент
состав
специфичность
спирт
сравнение
средства
стабильность
стандартные
статьи
стеараты
таблетки
таблицы
температура
терапия
термы
технология
течения
типа
точная
требования
третья
трехуровневый
уровень
уровни
условия
уфа
фазы
фактор
фармацевтическая
фильтры
формы
фосфатная
хабаровский
химики
химическая
химия
хроматография
хроматы
целлюлоза
цель
целью
четвертый
эксперимент
экспериментальная
экстрагент
этанол
этап
эффект
эффективный
Ваш уровень доступа: Посетитель (IP-адрес: 3.139.87.113)
Яндекс.Метрика