ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ, СТРУКТУРЫ И ЛОКАЛИЗАЦИИ СУБТИЛИЗИН-ПОДОБНОЙ ПРОТЕИНАЗЫ МИКРОСПОРИДИИ PARANOSEMA LOCUSTAE

Аннотация:

В работе представлены результаты анализа особенностей экспрессии, локализации и структуры субтилизин подобной протеиназы микроспоридии Paranosema locustae — паразита перелетной саранчи и ряда других видов прямокрылых. Гетерологичная экспрессия фермента микроспоридий в бактериях Е. coli позволила получить антитела к рекомбинантному белку и приступить к его изучению. Несмотря на присутствие в составе фермента N-концевого сигнального пептида, потенциально способного обеспечить его секрецию в цитоплазму зараженной клетки хозяина, иммуноблоттинг с полученными антителами показал специфичное накопление протеиназы в нерастворимой фракции гомогената спор. При этом фермент отсутствовал в стадиях внутриклеточного развития паразита и в цитоплазме зараженных клеток хозяина. Накопление мРНК, кодирующей изучаемый белок, в спорах микроспоридий было подтверждено с помощью ОТ-ПЦР. Гетерологичная экспрессия протеазы в дрожжевых грибах Pichia pastoris показала аналогичный результат. Фермент Р. 1оcustae не секретировался в культуральную среду и отсутствовал в цитоплазме дрожжевых клеток, накапливаясь в нерастворимой (мембранной) фракции гомогената. В целом полученные данные свидетельствую о том, что субтилизин-подобная протеиназа P. locustae, скорее, играет важную роль в физиологии спор, чем в паразито-хозяинных отношениях при внутриклеточном развитии.

Авторы:

Издание: Паразитология
Год издания: 2005
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2014.-N 5.-С.337-347. Библ. 17 назв.
Просмотров: 25