Поиск | Личный кабинет | Авторизация |
Молекулярные механизмы развития рака легкого у работников атомной отрасли
Аннотация:
Цель исследования — оценка мутационных событий в 5, 7 и 8-м экзонах гена р53 и выявление мутантного белка р53 в морфологически верифицированных случаях измененной (пролиферативные и предопухолевые изменения, рак легкого), а также гистологически неизменной ткани легкого работников, подвергшихся профессиональному облучению. Материал и методы. Для исследования использованы фиксированные в формалине парафиновые блоки (ФФПБ) неизмененной и измененной ткани легкого, полученные из радиобиологического репозитория тканей человека (РРТЧ). Срок хранения ФФПБ составлял 5—31 год. Для определения белка р53 применяли иммуногистохимический метод с использованием мышиных антител к протеину р53 («DAKO», Дания) и окраской диаминобензидин (ДАБ)-хромогеном. ДНК и ФФПБ ткани легкого выделяли с помощью набора QIAmp DNA FFPE Tissue Kit («QIAGEN», США). Полимеразную цепную реакцию для амплификации выбранных для изучения 5, 7 и 8-го экзонов гена р53 проводили используя последовательности генов и праймеров, специфичность которых проверена с помощью онлайн-ресурса (http: //www.ncbi.nlm.nih.gov/blast). Детекцию продуктов реакции ППР осуществляли с помощью метода гельэлектрофореза при временном градиенте температуры (TTGE) и метода секвенирования по Сэнджеру. Анализ полученных фрагментов ДНК осуществляли на секвенаторе ABI Prism 3100 Genetic Analyzer («Applied Biosystems», США). Компьютерный анализ ДНК проводили с использованием программы BLAST. Для статистической обработки данных использовали пакет прикладных программ Statistica 6.0. Результаты. Иммуногистохимический анализ показал отсутствие мутантного белка р53 в клетках неизмененной ткани легкого и увеличение количества клеток с мутантным белком р53 у всех больных при пролиферативных и предопухолевых изменениях и при раке легкого, что свидетельствовало о нарушении функции белка р53. Общее количество мутаций гена р53 в экзонах 5, 7 и 8 при пролиферативных и предопухолевых изменениях ткани легкого и раке легкого составило 25, 20 и 40% соответственно. Все обнаруженные мутации были трансверсиями (замена пурина на пиримидин или наоборот), что указывало на воздействие экзогенных мутагенов. Заключение. Результаты настоящего исследования подтвердили данные других исследователей, что мутации гена р53 при раке легкого наблюдаются в 40—70% случаев. Различия в числе случаев измененной ткани легкого с мутациями гена р53 (не более 40%) и в числе с экспрессией белка р53, обнаруженные в 100%, свидетельствуют о многоуровневой регуляции функции гена р53 в клетке. Ключевые слова: рак легкого, ген р53, белок р53.
Авторы:
Русинова Г.Г.
Издание:
Архив патологии
Год издания: 2015
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2015.-N 2.-С.10-15. Библ. 25 назв.
Просмотров: 46