ИНГИБИТОРЫ МАР-КИНАЗНОГО ПУТИ U0126 И PD98059 ПО-РАЗНОМУ ВЛИЯЮТ НА ОРГАНИЗАЦИЮ ТУБУЛИНОВОГО ЦИТОСКЕЛЕТА ПРИ СТИМУЛЯЦИИ ЭНДОЦИТОЗА РЕЦЕПТОРА ЭФР

Аннотация:

Для проверки гипотезы об участии ЭФР-стимулируемой МАР-киназы ERK1/2 в регуляции функционирования системы микротрубочек (МТ) изучено влияние двух широко применяемых ингибиторов ERK1/2 — U0126 и PD98095 — на организацию тубулинового цитоскелета в интерфазных культивируемых клетках линии HeLa в ходе эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов. Оказалось, что добавление на 30 мин U0126 или PD98059 к не стимулированным ЭФР клеткам не влияло на радиально организованную систему МТ. Однако уже через 15 мин после стимуляции эндоцитоза ЭФР в случае предварительного добавления ингибитора U0126 число МТ уменьшалось вплоть до полной их деполимеризации. Если же стимуляцию эндоцитоза ЭФР поводили в присутствии PD98059, незначительная деполимеризация МТ через 15 мин наблюдалась в основном с минус-концов МТ, в то время как примембранные участки, напротив, стабилизировались, о чем свидетельствовала высокая степень ацетилирования тубулина, и такая картина сохранялась в течение всего времени эксперимента. Выяснилось также, что ингибиторы влияют и на динамику эндоцитоза ЭФР-рецепторных комплексов. Количественный анализ показал, что после стимуляции эндоцитоза в присутствии U0126 формируется большее число эндосом (по сравнению с контролем), незначительно изменяющееся в течение всего времени эксперимента; эндосомы локализуются в примембранной области. Под действием PD98059 эндосом формировалось меньше, чем в контроле, при этом, несмотря на наличие отдельных интактных МТ, они медленнее кластеризовались (перемещались в околоядерную область клетки). Оба ингибитора существенно уменьшали ассоциацию с белком слияния ранних эндосом ЕЕА1, что свидетельствует о замедлении слияний и созревания эндосом в обоих случаях. Показано также, что влияние ингибиторов на появление фосфорилированых форм ERK1/2 различно: U0126 полностью подавлял появление фосфо-ЕRК1/2; в присутствии PD98059 через 15 мин после стимуляции эндоцитоза обе формы ERK резко активировались, а через 60 мин оставалась активной только ERK2. В обоих случаях динамика активации МАР-киназ существенно отличалась от контрольной. Результаты указывают на участие ЭФР-стимулированного МАР-киназного каскада в регуляции цитоскелета. В то же время они демонстрируют неэквивалентность двух исследованных нами и широко применяемых ингибиторов по отношению к влиянию не только на активность МАР-киназы, но и на такие взаимосвязанные процессы, как изменения организации цитоскелета и динамика эндоцитоза сигнального рецептора.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2015
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2015.-N 4.-С.269-277. Библ. 0 назв.
Просмотров: 49