ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОЛИКАТИОННЫХ НАНОЧАСТИЦ ПОЛИЭТИЛЕНИМИН-ПОЛИГИДРОЗИД-ХИТОЗАНА (ПЭИ-ПГ-ОХГ) В КАЧЕСТВЕ ВЕКТОРА ДЛЯ КОРОТКИХ ИНТЕРФЕРИРУЮЩИХ РНК, НАПРАВЛЕННЫХ НА ПОДАВЛЕНИЕ РЕПЛИКАЦИИ ВИРУСА ПРОСТОГО ГЕРПЕСА 2 ТИПА

Аннотация:

Цель: Оценка противовирусного действия миРНК в составе наночастиц поликатионного соединения к мРНК белка vpl6 (reHUL48) вируса простого герпеса 2 типа (ВПГ-2) in vitro. Использованы: 50% водный раствор поиэтиленимина(ВОН, Великобритания), хитозан, содержащий около 15% N-ацетилированных глюкозаминовых звеньев (Сонат, Россия), гидразин-гидрат и другие химические реактивы (Химмед, Россия); перевиваемая линия клеток Vero, штамм MS ВПГ-2. Клетки Vero культивировали в среде ДМЕМ с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки при 37°С в атмосфере с 5% СО2. Оценку жизнеспособности клеток проводили с помощью витального красителя Neutral Red и МТТ-теста. Праймеры и зонды для ПЦР-РВ были моделированы в компьютерной программе Vector NTI 8,0 в соответствии с последовательностями мРНК исследуемых генов (последовательности мРНК взяты в Gen Bank) и синтезированы в фирме Синтол (РФ). РТ ПЦР-тесты ставили с использованием стандартной процедуры. Синтез комплексов ПЕИ-ПГ-хитозан осуществляли по Кривцову Г.Г. и др. (2010). В результате для изучения влияния киРНК на репликацию ВПГ-2 был осуществлен дизайн и синтез нуклеотидных последовательностей, обладающих интерферирующей активностью по отношению к этому вирусу. При одновременном добавлении к клеткам Vero ВПГ-2 и специфических киРНК в культуре клеток наблюдали значительное (на 4 lg) снижение урожая вируса. Был определен уровень экспрессии мРНК UL48 после воздействия различных вариантов киРНК. Показано, что наиболее выраженный вирусингибирующий эффект вызывал вариант S2 киРНК, нацеленный на центр РНК-мишени (уровень экспрессии исследуемого гена снижался на 0,5 lg). Установлено, что киРНК в составе комплексов ПЕИ-ПГ-хитозан обладают in vitro выраженной подавляющей репликацию ВПГ-2 активностью. Полученные результаты могут быть использованы при создании новых терапевтических препаратов против герпесвирусов.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2015
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2015.-N 3.-С.31-37. Библ. 17 назв.
Просмотров: 56