Исследование аэробного биосинтеза 4-гидроксимасляной кислоты клетками Escherichia coli при гетерологичной экспрессии гена 2-кетоглутарат-декарбоксилазы

Аннотация:

Ген Rv 1248с (kgd) Mycobacterium tuberculosis был экспрессирован в рекомбинантном штамме Е. coli с инактивированными путями смешаннокислотного брожения и анаэробной генерации ацетил-КоА, а также с модифицированной системой транспорта и фосфорилирования глюкозы и измененной регуляцией гена yd/G, кодирующего NADPH-зависимую дегидрогеназу гидроксикарбоновых кислот. Установлено, что при интенсивном формировании 2-кетоглутарата в ходе аэробной утилизации глюкозы синтез 4-гидроксимасляной кислоты рекомбинантным штаммом Е. coli возможен не только при прямой конверсии 2-кетоглутарата в сукцинат-полуальдегид под действием чужеродной ферментативной активности, но и в результате вовлечения соответствующего интермедиата цикла трикарбоновых кислот в каскад нативных биохимических реакций. Индуцированная экспрессия гена 2-кетоглутарат-декарбоксилазы в клетках рекомбинантного штамма обеспечивала эффективную конверсию 2-кетоглутарата в производные сукцинат-полуальдегида; при этом концентрация синтезированной 4-гидроксимасляной кислоты достигала 0,3 мМ и лимитировалась, по-видимому, активностью фермента, катализирующего терминальную стадию восстановления предшественника.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2015
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2015.-N 2.-С.46-54. Библ. 16 назв.
Просмотров: 40